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參考價 | ¥160-¥310 |
參考價:¥160 ~ ¥310
100管/48樣 50管/24樣
CAS:詳見說明書 純度:詳見說明書 分子量:詳見說明書 分子式:詳見說明書 供貨周期:現貨 規格:100管/48樣、50管/24樣 貨號:YLK-SH130 應用領域:化工,生物產業 主要用途:科研
>100管/48樣 | 310元 | 369盒可售 |
50管/24樣 | 160元 | 288盒可售 |
更新時間:2024-06-29 15:25:07瀏覽次數:710評價
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CAS | 詳見說明書 | 純度 | 詳見說明書 |
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分子量 | 詳見說明書 | 分子式 | 詳見說明書 |
供貨周期 | 現貨 | 規格 | 100管/48樣、50管/24樣 |
貨號 | YLK-SH130 | 應用領域 | 化工,生物產業 |
主要用途 | 科研 | 測定方法: | 微量法、可見分光光度法 |
堿性磷酸酶(AKP/ALP)活性測定試劑盒說明書
微量法100T/48S
注 意 :正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
AKP/ALP是一種含鋅的糖蛋白酶,在堿性環境中可水解各種天然及人工合成的磷脂單酯化合物。AKP/ALP廣泛分布于人體各臟器中,以肝臟為主。
測定原理:
在堿性環境中,AKP/ALP催化磷酸苯二鈉生成游離酚;酚與4-氨基安替/比林和鐵氰hua鉀反應紅色亞醌衍生物,在510nm有特征光吸收;通過測定510 nm吸光度增加速率,來計算AKP活性。
自備儀器和用品:
可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體×1瓶,4℃避光保存。
試劑三:液體×1瓶,4℃避光保存。
試劑四:液體×1瓶,4℃避光保存,未變成藍綠色之前均可使用。
標準品:液體×1支(EP管中),2 μmol/mL酚標準液,4℃保存。
粗酶液提取:
1. 組織:按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿,4℃、8000g離心10min,取上清液待測。
2. 細菌或細胞:按照細菌或細胞數量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后8000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。
3. 血液可直接測定,或者適當稀釋后測定。
測定步驟:
1. 分光光度計/酶標儀預熱30min,調節波長到510 nm,蒸餾水調零。
2. 試劑三置于37℃水浴中預熱30 min。
3. 空白管:取EP管,加入4μL蒸餾水,40μL試劑二,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四120μL,混勻后于510nm測定吸光度,記為A空白管。
4. 標準管:取EP管,加入4μL標準品,40μL試劑二,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四120μL,混勻后于510nm測定吸光度,記為A標準管。
5. 對照管:取EP管,加入4μL上清液,40μL蒸餾水,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四120μL,混勻后于510nm測定吸光度,記為A測定管。
6. 測定管:取EP管,加入4μL上清液,40μL試劑二,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;
加入試劑四120μL,混勻后于510nm測定吸光度,記為A測定管。
其中標準管和空白管只需做一管,測定管和對照管每個樣均需做。
注意:空白管和標準管只需測定一次。
AKP/ALP活性計算:
1. 血液中AKP/ALP活力計算
活性單位定義:37℃中每毫升血液每分鐘催化產生1μmol酚定義為1個酶活單位。
AKP/ALP活力(μmol/min /mL)= [C標準品×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)×V反總] ÷V樣÷T=6.8×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)
2. 組織、細菌或細胞中AKP/ALP活性計算
(1)按照蛋白濃度計算
活性單位定義:37℃中每毫克蛋白每分鐘催化產生1 μ mol酚定義為1個酶活單位。
AKP/ALP(μmol/min/mg prot)=[C標準品×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)×V反總]÷(Cpr×V樣)÷T=6.8×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管) ÷Cpr
(2)按照樣本質量計算
活性單位定義:37℃中每克組織每分鐘催化產生1 μ mol酚定義為1個酶活單位。
AKP/ALP(μmol/min/g 鮮重)=[C標準品×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T=6.8×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管) ÷W
(3)按照細菌或細胞數量計算
活性單位定義:37℃中每104個細菌或細胞每分鐘催化產生1 μ mol酚定義為1個酶活單位。AKP/ALP (μmol/min/104 cell)= [C標準品×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)×V反總]÷(細胞數量×V樣÷V樣總)÷T= 6.8×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管) ÷細胞數量
C標準品:2μmol/mL;V反總:反應體系總體積(mL),205μL=0.205mL; Cpr:粗酶液蛋白質濃度(mg/mL),需要另外測定,建議使用本公司生產的BCA蛋白質含量測定試劑盒;W :樣品質量;V樣:加入反應體系中上清液體積(mL),0.004mL;V樣總:提取液體積,1 mL;T:反應時間(min),15 min。
注意事項:
1.試劑二、試劑三和試劑四均需避光保存。
2.試劑四變藍綠色后不能再使用。
3.加入試劑四后必須立即混勻,否則顯色不wan全。
堿性磷酸酶(AKP/ALP)活性測定試劑盒僅供科研!