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目錄:優利科(上海)生命科學有限公司>>科研試劑盒>>生化試劑盒>> 硫氧還蛋白氧化還原酶(TrxR)試劑盒

硫氧還蛋白氧化還原酶(TrxR)試劑盒
  • 硫氧還蛋白氧化還原酶(TrxR)試劑盒
參考價250-450
具體成交價以合同協議為準

參考價:¥250 ~ ¥450

具體成交價以合同協議為準
  • YLKBIO 品牌
  • 型號
  • 生產商 廠商性質
  • 上海 所在地
規格

100管/96樣 50管/48樣

屬性

CAS:詳見說明書 純度:詳見說明書 分子量:詳見說明書 分子式:詳見說明書 供貨周期:現貨 規格:100管/96樣、50管/48樣 貨號:YLK-SH127 應用領域:化工,生物產業 主要用途:科研

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規格
100管/96樣450元130盒 可售
50管/48樣250元92盒 可售

更新時間:2024-06-29 15:30:56瀏覽次數:771評價

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CAS 詳見說明書 純度 詳見說明書
分子量 詳見說明書 分子式 詳見說明書
供貨周期 現貨 規格 100管/96樣、50管/48樣
貨號 YLK-SH127 應用領域 化工,生物產業
主要用途 科研 測定方法: 微量法、可見分光光度法
硫氧還蛋白氧化還原酶(TrxR)試劑盒測定意義:TrxR 是一種 NADPH 依賴的包含 FAD 結構域的二聚體硒酶,屬于吡啶核苷酸-二硫化物氧化還原酶家族成員,與硫氧還蛋白以及 NADPH 共同構成了硫氧還蛋白系統。TrxR 與 GR 活性類似,催化 GSSG 還原生成 GSH,是谷胱/甘肽氧化還原循環關鍵酶之一。

硫氧還蛋白氧化還原酶(TrxR)試劑盒說明書

 

微量法100T/96S

 

 

注 意:正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。

 

 

測定意義:

 

TrxR 是一種 NADPH 依賴的包含 FAD 結構域的二聚體硒酶,屬于吡啶核苷酸-二硫化物氧化還原酶家族成員,與硫氧還蛋白以及 NADPH 共同構成了硫氧還蛋白系統。TrxR GR 活性類似,催化 GSSG 還原生成 GSH,是谷胱/甘肽氧化還原循環關鍵酶之一。

 

 

測定原理:

 

TrxR 催化 NADPH 還原 DTNB 生成 TNB NADP+TNB 412 nm 有特征吸收峰,通過測定 412nm 波長處 TNB 的增加速率,即可計算 TrxR 活性。

 

自備儀器和用品:

 

低溫離心機、可調節移液器、可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96 孔板、和蒸餾水。

 

 

試劑組成和配制:

 

試劑一:液體 120mL×1 瓶,4保存。

 

試劑二:液體 2mL×1 瓶,4避光保存。

 

試劑三:粉劑×1 管,4保存。臨用前加入 2mL 蒸餾水溶解。

 

 

粗酶液提取:

 

1.        組織:按照組織質量(g):試劑一體積(mL) 15~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 試劑一)進行冰浴勻漿。8000g4離心 10min,取上清置冰上待測。

 

2.        細菌、真菌:按照細胞數量(104 個):試劑一體積(mL)為 500~10001 的比例(建議 500 萬細胞加入 1mL 試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7 秒,總時間 3min);然后 8000g4,離心 10min,取上清置于冰上待測。

 

3.        血清等液體:直接測定。

 

 

TrxR 測定操作:

 

1.    分光光度計/酶標儀預熱 30 min,調節波長到 412nm,用蒸餾水調零。

 

2.    試劑一在 25(一般物種)或者 37(哺乳動物)預熱 30min

 

3.    空白管:取微量玻璃比色皿或 96 孔板,加入 20μL 試劑二,20μL 試劑三,160μL 試劑一,迅速混勻后于 412 nm 測定 10 s 310 s 吸光度,記為 A1 A2A 空白管=A2-A1

 

4.    測定管:取微量玻璃比色皿或 96 孔板,加入 20μL 試劑二,20μL 試劑三,140μL 試劑一, 20μL 上清液,迅速混勻后于 412 nm 測定 10 s 310 s 吸光度,記為 A3 A4A 測定管

 

=A4-A3

 

注意:空白管只需測定一次。

 

 

TrxR 活性計算公式:

 

(1). 按蛋白濃度計算

 

活性單位定義:在 25或者 37中,每毫克蛋白每分鐘催化 1nmol DTNB 還原為 1 個酶活單位。

 

TrxRnmol/min /mg prot=A 測定管-A 空白管)÷ε÷d×V 反總÷(Cpr×V )÷T = 147×A 測定管-A 空白管)÷Cpr

 

(2). 按樣本質量計算

 

活性單位定義:在 25或者 37中,每克樣本每分鐘催化 1nmol DTNB 還原為 1 個酶活單位。

 

 

TrxRnmol/min /g 鮮重)=A 測定管-A 空白管)÷ε÷d×V 反總÷(W×V ÷V 樣總)÷T

 

 

 

=  147×A 測定管-A 空白管)÷W

 

3)按細胞數量計算

 

活性單位定義:在 25或者 37中,每 104 個細胞每分鐘催化 1nmol DTNB 還原為 1 個酶

 

活單位。

 

TrxRnmol/min/104 cell=A 測定管-A 空白管)÷ε÷d×V 反總÷(細胞數量×V ÷V

 

)÷T

 

= 147×A 測定管-A 空白管)÷ 細胞數量

 

4)按液體體積計算

 

活性單位定義:在 25或者 37中,每毫升液體每分鐘催化 1nmol DTNB 還原為 1 個酶活單位。

 

TrxRnmol/min /mL=A 測定管-A 空白管)÷ε÷d×V 反總÷V ÷T

 

=  147×A 測定管-A 空白管)

 

εTNB 412nm 處的微摩爾消光系數,0.0136 L/μ mol/cmd:比色皿光徑,1cmV 反總:

 

反應體系總體積(L),200μL=2×10-4 LCpr:上清液蛋白質濃度(mg/mL),需要另外測定;

 

W     :樣品質量;V 樣:加入反應體系中上清液體積(mL),20μL=0.02 mLV 樣總:提取液體積,1 mLT:反應時間(min),5 min

 

b.使用 96 孔板測定的計算公式如下

 

(1). 按蛋白濃度計算

 

活性單位定義:在 25或者 37中,每毫克蛋白每分鐘催化 1nmol DTNB 還原為 1 個酶活

 

單位。

 

TrxRnmol/min /mg prot=A 測定管-A 空白管)÷ε÷d×V 反總÷(Cpr×V )÷T

 

=   294×A 測定管-A 空白管)÷Cpr

 

(2). 按樣本質量計算

 

活性單位定義:在 25或者 37中,每克樣本每分鐘催化 1nmol DTNB 還原為 1 個酶活單位。

 

TrxRnmol/min /g 鮮重)=A 測定管-A 空白管)÷ε÷d×V 反總÷(W×V ÷V 樣總)÷T

 

=  294×A 測定管-A 空白管)÷W

 

3)按細胞數量計算

 

活性單位定義:在 25或者 37中,每 104 個細胞每分鐘催化 1nmol DTNB 還原為 1 個酶

 

活單位。

 

TrxRnmol/min/104 cell=A 測定管-A 空白管)÷ε÷d×V 反總÷(細胞數量×V ÷V

 

)÷T

 

= 294×A 測定管-A 空白管)÷ 細胞數量

 

4)按液體體積計算

 

活性單位定義:在 25或者 37中,每毫升液體每分鐘催化 1nmol DTNB 還原為 1 個酶活單位。

 

TrxRnmol/min /mL=A 測定管-A 空白管)÷ε÷d×V 反總÷V ÷T

 

=  294×A 測定管-A 空白管)

 

εTNB 412nm 處的微摩爾消光系數,0.0136 L/μ mol/cmd96 孔板光徑,0.5cmV 反總:反應體系總體積(L),200μL=2×10-4 LCpr:上清液蛋白質濃度(mg/mL),需要另外測定;W :樣品質量;V 樣:加入反應體系中上清液體積(mL),20μL=0.02 mLV 樣總:提取液體積,1 mLT:反應時間(min),5 min

 

注意事項:

1.        測定前須先取 12 個樣做預實驗,使得吸光值在 5min 內程線性變化。哺乳動物組織及血液制品 TrxR 活力測定時,一般須用蒸餾水稀釋 5 倍左右;測定過程操作須迅速。

2.        試劑二和試劑三配制好后 3 天內使用完。

硫氧還蛋白氧化還原酶(TrxR)試劑盒僅供科研!

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