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目錄:優利科(上海)生命科學有限公司>>科研試劑盒>>生化試劑盒>> NADP磷酸酶(NADPase)試劑盒

NADP磷酸酶(NADPase)試劑盒
  • NADP磷酸酶(NADPase)試劑盒
參考價520-980
具體成交價以合同協議為準

參考價:¥520 ~ ¥980

具體成交價以合同協議為準
  • YLKBIO 品牌
  • 型號
  • 生產商 廠商性質
  • 下載 產品資料
  • 上海 所在地
規格

100管/96樣 50管/48樣

屬性

CAS:詳見說明書 純度:詳見說明書 分子量:詳見說明書 分子式:詳見說明書 供貨周期:現貨 規格:100管/96樣、50管/48樣 貨號:YLK-SH125 應用領域:化工,生物產業 主要用途:科研

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規格
100管/96樣980元209盒 可售
50管/48樣520元178盒 可售

更新時間:2024-06-29 15:34:46瀏覽次數:688評價

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CAS 詳見說明書 純度 詳見說明書
分子量 詳見說明書 分子式 詳見說明書
供貨周期 現貨 規格 100管/96樣、50管/48樣
貨號 YLK-SH125 應用領域 化工,生物產業
主要用途 科研 測定方法: 微量法、可見分光光度法
NADP磷酸酶(NADPase)試劑盒測定意義:
NADPase主要存在于植物組織中,是生物體內唯yi催化NADP+降解為NAD+的酶,與NADK一起調控NAD和NADP之間的平衡。

NADP磷酸酶(NADPase)試劑盒說明書

                                  微量法 100/96

 

    意:正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義:

NADPase主要存在于植物組織中,是生物體內唯yi催化NADP+降解為NAD+的酶,與NADK一起調控NADNADP之間的平衡。

 

測定原理:

NADPase能夠催化NADP+水解為NAD+和無機磷的反應,通過測定無機磷的量來測定NADPase活性。

所需的儀器和用品:

可見分光光度計/酶標儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水

 

試劑的組成和配制:

提取液:100mL×1瓶,4保存。

試劑一:液體15 mL×1瓶, 4保存。

試劑二:粉劑×4支,-20保存;用時加入1 mL試劑一充分溶解備用,現配現用。

試劑三:粉劑×1 , 4保存。用時加入25mL蒸餾水,溶解后4可保存一周。

試劑四:粉劑×1, 4保存。用時加入25mL蒸餾水,溶解后4可保存一周。

試劑五:液體 25mL×1 瓶,室溫保存。

試劑六:10mmol/L 標準磷貯備液 10mL×1 瓶,4保存。

0.5μmol/mL 標準磷應用液配制:將試劑六20倍稀釋,即取 0.5mL試劑六9.5蒸餾水,充分混勻。

定磷試劑的配制:按H2O: 試劑三:試劑四:試劑五=2:1:1:1 的比例配制,配好的定磷試劑

              應為淺黃色,若無色則試劑失效,若是藍色則為磷污染,定磷劑現用現配。

注意:配試劑最好用新的燒杯、玻棒和玻璃移液器,也可以用一次性塑料器皿,避免磷污染。

 

樣本的前處理:

按照組織質量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4離心10min,取上清,置冰上待測。

 

操作步驟:

1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長至660nm,蒸餾水調零。

2、酶促反應(在EP管中加入下列試劑)

試劑名稱μL

測定管

對照管

試劑一

120

120

試劑二

40

40

37(哺乳動物)或25℃(其它物種)預熱5min

樣本

40


蒸餾水


40

 

37(哺乳動物)或25℃(其它物種)準確反應30min后,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失),冷卻后,10000g 25離心5min,取上清

 

3、定磷(在EP管或96孔板中加入下列試劑)


標準管

空白管

測定管

對照管

0.5μmol/ml標準磷應用液

20




蒸餾水


20



上清液



20

20

定磷試劑

200

200

200

200

混勻,25室溫放置30min,在 660nm處,記錄各管吸光值。

 

注意事項:

1、此法具有微量、靈敏、快速的特點。所以對測定所用試管要求嚴格,要沒有一點磷,若試管放過磷酸或磷酸鹽緩沖液,一定要洗得非常干凈,要先用洗潔精加水煮,再用自來水沖,最后用蒸餾水沖干凈。最好用一次性塑料管或新玻璃管,避免磷污染是檢測成敗的關鍵。

2、標準管、空白管和對照管只要做一次即可。

 

NADPase酶活性計算:

1、按組織蛋白濃度計算:

定義:每小時每毫克組織蛋白NADPase分解NADP 產生1μmol無機磷的量為一個 NADPase活力單位。

NADPase (μmol/h/mg prot)=(C標準管×V)×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)÷

(V×Cpr)÷T=5×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)÷Cpr

2、按樣本鮮重計算:

定義:每小時每g組織NADPase分解NADP 產生1μmol無機磷的量為一個 NADPase活力單位。

NADPase (μmol/h /g鮮重)=(C標準管×V)×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)×V÷(W× V÷V樣總)÷T=5×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)÷W

C標準管:標準管濃度,0.5μmol/mLV總:酶促反應總體積,0.2mLV樣:加入樣本體積,0.04mL V樣總:加入提取液體積,1mLT:反應時間,0.5小時;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mLW:樣本鮮重,g

NADP磷酸酶(NADPase)試劑盒僅供科研!

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