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參考價 | ¥260-¥500 |
參考價:¥260 ~ ¥500
100管/96樣 50管/48樣
CAS:詳見說明書 純度:詳見說明書 分子量:詳見說明書 分子式:詳見說明書 供貨周期:現貨 規格:100管/96樣、50管/48樣 貨號:YLK-SH121 應用領域:化工,生物產業 主要用途:科研
>100管/96樣 | 500元 | 141盒 可售 |
50管/48樣 | 260元 | 163盒 可售 |
更新時間:2024-06-29 15:42:02瀏覽次數:672評價
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CAS | 詳見說明書 | 純度 | 詳見說明書 |
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分子量 | 詳見說明書 | 分子式 | 詳見說明書 |
供貨周期 | 現貨 | 規格 | 100管/96樣、50管/48樣 |
貨號 | YLK-SH121 | 應用領域 | 化工,生物產業 |
主要用途 | 科研 | 測定方法: | 微量法、紫外分光光度法 |
胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)試劑盒說明書
微量法100管/96樣
注 意:正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
ICDHc(EC 1.1.1.42)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,催化異檸檬酸脫氫脫羧生成 α-酮戊二酸,同時還原NADP+生成NADPH。ICDHc是細胞質中除了磷酸戊糖途徑外又一種NADPH重要來源,在逆境中該酶活性通常會發生顯著變化。
測定原理:
利用ICDHc催化NADP+還原成NADPH反應,在340 nm下測定NADPH濃度的增加。
所需的儀器和用品:
紫外分光光度計/酶標儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體19 mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1瓶,4℃保存;
試劑三:粉劑×1瓶,-20℃保存;
樣本的前處理:
1、細菌、細胞或組織樣品的制備:
細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、血清(漿)樣品:直接檢測。
測定步驟:
1、 分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長至340nm,蒸餾水調零。
2、 將試劑二和試劑三轉移至試劑一中充分溶解;在37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴10min以上;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。
3、 在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本和190μL試劑一,混勻后立即記錄340nm處20s后吸光值A1和 2min20s后的吸光值A2,計算ΔA=A2-A1。
注意事項:
1、 若A2-A1大于0.5,需將酶液用提取液稀釋,使A2-A1小于0.5,可提高檢測靈敏度。計算公式中乘以
相應稀釋倍數。
2、 若A2-A1小于0.005,可延長反應時間到5min或10min。
ICDHc活力單位的計算:
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、血清(漿)ICDHc活力的計算:
單位的定義:每mL血清(漿)每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
ICDHc(nmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T=1608×ΔA
2、組織、細菌或細胞中ICDHc活力的計算:
(1)按樣本蛋白濃度計算:
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
ICDHc(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算:
單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
ICDHc(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=1608×ΔA÷W
(3) 按細菌或細胞密度計算:
單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
ICDHc(nmol/min/104)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=3.216×ΔA
V反總:反應體系總體積,2×10-4 L;ε:NADPH摩爾消光系數,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.01 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,2 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;500:細菌或細胞總數,500萬。
b.用96孔板測定的計算公式如下
1、血清(漿)ICDHc活力的計算:
單位的定義:每mL血清(漿)每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
ICDHc(nmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T=3216×ΔA
2、組織、細菌或細胞中ICDHc活力的計算:
(1)按樣本蛋白濃度計算:
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
ICDHc(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=3216×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算:
單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
ICDHc(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=3216×ΔA÷W
(3) 按細菌或細胞密度計算:
單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
ICDHc(nmol/min/104)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=6.432×ΔA
V反總:反應體系總體積,2×10-4 L;ε:NADPH摩爾消光系數,6.22×103 L / mol /cm;d:96孔板光徑,0.5cm;V樣:加入樣本體積,0.01 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,2 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;500:細菌或細胞總數,500萬。
胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)試劑盒僅供科研!