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參考價 | ¥750-¥1400 |
參考價:¥750 ~ ¥1400
100管/96樣 50管/48樣
CAS:詳見說明書 純度:詳見說明書 分子量:詳見說明書 分子式:詳見說明書 供貨周期:現貨 規格:100管/96樣、50管/48樣 貨號:YLK-SH119 應用領域:化工,生物產業 主要用途:科研
>100管/96樣 | 1400元 | 117盒可售 |
50管/48樣 | 750元 | 99盒可售 |
更新時間:2024-06-29 15:46:45瀏覽次數:686評價
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CAS | 詳見說明書 | 純度 | 詳見說明書 |
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分子量 | 詳見說明書 | 分子式 | 詳見說明書 |
供貨周期 | 現貨 | 規格 | 100管/96樣、50管/48樣 |
貨號 | YLK-SH119 | 應用領域 | 化工,生物產業 |
主要用途 | 科研 | 測定方法: | 微量法、紫外分光光度法 |
6磷酸葡萄糖酸脫氫酶(6PGDH)測定試劑盒說明書
微量法100T/96S
注 意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
磷酸戊糖途徑途徑中6-磷酸葡萄糖脫氫酶(G6PDH)和6PGDH依次催化NADPH合成,與能量的平衡、生長速率和細胞活力等密切相關。此外,6PGDH逆境生理中具有重要作用。
測定原理:
6PGDH催化6-磷酸葡萄糖酸和NADP+生成NADPH,NADPH在340 nm有特征吸收峰,而NADP+沒有;通過測定340nm吸光度增加速率,計算6PGDH活性。
自備儀器和用品:
低溫離心機、水浴鍋、可調式移液槍、酶標儀、96孔板和蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體19mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:粉劑×1瓶,-20℃避光保存。
試劑三:粉劑×1瓶,-20℃保存。
粗酶液提取:
1、細菌、細胞或組織樣品的制備:
細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):提取液體積(mL)為1000~5000:1的比例(建議2000萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、血清(漿)樣品:直接檢測。
測定操作:
1. 酶標儀預熱30min,調節波長到340 nm。
2將試劑二和試劑三轉移至試劑一中充分溶解;在37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴10min以上;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。
3. 取96孔板,依次加入10μL樣本190μL試劑一,于340nm處測定3min內吸光值變化,第10 s吸光值記為A1,第190s吸光值記為A2。△A=A2-A1
注意:空白管只需要做一次。
計算公式:
使用96孔板測定的計算公式如下
1、血清(漿)6PGDH活力的計算:
單位的定義:每mL血清(漿)每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
6PGDH(nmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T=2143.6×ΔA
2、組織、細菌或細胞中6PGDH活力的計算:
(1)按樣本蛋白濃度計算:
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
6PGDH(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=2143.6×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算:
單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
6PGDH(nmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=2143.6×ΔA÷W
(3)按細菌或細胞密度計算:
單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
6PGDH(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(2000×V樣÷V樣總) ÷T=1.072×ΔA
V反總:反應體系總體積,1×10-3 L;ε:NADPH摩爾消光系數,6.22×103 L / mol /cm;d:96孔板光徑,0.5cm;V樣:加入樣本體積,0.05 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,3 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;2000:細菌或細胞總數,2000萬。
6磷酸葡萄糖酸脫氫酶(6PGDH)測定試劑盒僅供科研!