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目錄:優利科(上海)生命科學有限公司>>科研試劑盒>>生化試劑盒>> 檸檬酸合酶(citrate synthase,CS)試劑盒

檸檬酸合酶(citrate synthase,CS)試劑盒
  • 檸檬酸合酶(citrate synthase,CS)試劑盒
參考價1200-3500
具體成交價以合同協議為準

參考價:¥1200 ~ ¥3500

具體成交價以合同協議為準
  • YLKBIO 品牌
  • 型號
  • 生產商 廠商性質
  • 下載 產品資料
  • 上海 所在地
規格

100管/48樣 50管/24樣 25管/12樣

屬性

CAS:詳見說明書 純度:詳見說明書 分子量:詳見說明書 分子式:詳見說明書 供貨周期:現貨 規格:100管/48樣、50管/24樣、25管/12樣 貨號:YLK-SH115 應用領域:化工,生物產業 主要用途:科研

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規格
100管/48樣3500元120盒可售
50管/24樣2200元93盒可售
25管/12樣1200元108盒可售

更新時間:2024-06-29 15:55:20瀏覽次數:794評價

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CAS 詳見說明書 純度 詳見說明書
分子量 詳見說明書 分子式 詳見說明書
供貨周期 現貨 規格 100管/48樣、50管/24樣、25管/12樣
貨號 YLK-SH115 應用領域 化工,生物產業
主要用途 科研 測定方法: 微量法、可見分光光度法
CS(EC 2.3.3.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞的線粒體基質中,是三羧酸循環第一個限速酶,是三羧酸循環主要調控位點之一。檸檬酸合酶(citrate synthase,CS)試劑盒現貨供應。

檸檬酸合酶(citrate synthaseCS)試劑盒說明書

                                        微量法100/48

   正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義:                          

CSEC 2.3.3.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞的線粒體基質中,是三羧酸循環第一個限速酶,是三羧酸循環主要調控位點之一。

測定原理:

CS催化乙酰CoA和草酰乙酸產生檸檬酰輔酶/A,進一步水解產生檸檬酸;該反應促使無色的DTNB轉變成黃色的TNB,在 412nm處有特征吸光值。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、無水乙醇和蒸餾水

試劑組成和配制:

試劑一:液體100mL×1瓶,-20保存;

試劑二:液體20mL×1瓶,-20保存;

試劑三:液體1.5mL×1支,-20保存;

試劑四:液體28mL×1瓶,4保存;

試劑五:粉劑×1瓶,4保存;

試劑六:粉劑×1支,-20保存,臨用前加入1.2mL蒸餾水,用不完的試劑仍-20保存;

樣本的前處理:

組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:

       稱取約0.1g組織或收集500萬細胞,加入1mL試劑一和10uL 試劑三,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。

       將勻漿600g4離心5min

       棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,11000g4離心10min

       上清液即胞漿提取物,可用于測定從線粒體泄漏的CS(此步可選做)。

       在步驟④的沉淀中加入200uL試劑二和2uL 試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3秒,間隔10秒,重復30次),用于線粒體CS測定。

測定步驟:

1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長至412nm,蒸餾水調零。

2、樣本測定

1)在試劑五中加入0.6mL無水乙醇和13mL試劑四,混勻,37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)孵育5min用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融

2測定管:在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本、220μL試劑五10μL試劑六,混勻,37℃反應15min后立即測定吸光值A1

3對照管:在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本、220μL試劑四10μL試劑六,混勻,37

反應15min后立即測定吸光值A2

4計算ΔA=A1-A2,每個測定管設一個對照管。

CS活性計算:

a.        使用微量石英比色皿測定的計算公式如下:

1)按樣本蛋白濃度計算:

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產生1 nmol TNB定義為一個酶活力單位。

CSnmol/min /mg prot)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(V×Cpr) ÷T=117.6×ΔA÷Cpr

此法需要自行測定樣本蛋白質濃度。

2)按樣本鮮重計算:

單位的定義:每g組織每分鐘催化產生1 nmol TNB定義為一個酶活力單位。

CSnmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V反總÷ε×d×109W× V÷V樣總)÷T=23.8×ΔA÷W

3)按細菌或細胞密度計算:

單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘催化產生1 nmol TNB定義為一個酶活力單位。

CSnmol/min /104 cell=[ΔA×V反總÷ε×d×109500×V÷V樣總)÷T=0.0475×ΔA

V反總:反應體系總體積,2.4×10-4 LεTNB摩爾消光系數,1.36×104 L / mol /cmd:比色皿光徑,1cmV樣:加入樣本體積,0.01 mLV樣總:加入提取液體積,0.202 mLT:反應時間,15 minCpr:樣本蛋白質濃度,mg/mLW:樣本質量,g500:細胞或細菌總數,500萬。

b.       使用96孔板測定的計算公式如下:

1)按樣本蛋白濃度計算:

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產生1 nmol TNB定義為一個酶活力單位。

CSnmol/min /mg prot)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(V×Cpr) ÷T=235.3×ΔA÷Cpr

此法需要自行測定樣本蛋白質濃度。

2)按樣本鮮重計算:

單位的定義:每g組織每分鐘催化產生1 nmol TNB定義為一個酶活力單位。

CSnmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V反總÷ε×d×109W ×V÷V樣總)÷T=47.5×ΔA÷W

3)按細菌或細胞密度計算:

單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘催化產生1 nmol TNB定義為一個酶活力單位。

CSnmol/min /104 cell=[ΔA×V反總÷ε×d×109500×V÷V樣總)÷T=0.095×ΔA

V反總:反應體系總體積,2.4×10-4 LεTNB摩爾消光系數,1.36×104 L / mol /cmd96孔板光徑,0.5cmV樣:加入樣本體積,0.01 mLV樣總:加入提取液體積,0.202 mLT:反應時間,15 minCpr:樣本蛋白質濃度,mg/mLW:樣本質量,g500:細胞或細菌總數,500萬。

檸檬酸合酶(citrate synthaseCS)試劑盒僅供科研!


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