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參考價 | ¥640-¥1100 |
參考價:¥640 ~ ¥1100
100管/48樣 50管/24樣
CAS:詳見說明書 純度:詳見說明書 分子量:詳見說明書 分子式:詳見說明書 供貨周期:現貨 規格:100管/48樣、50管/24樣 貨號:YLK-SH103 應用領域:化工,生物產業 主要用途:科研
>100管/48樣 | 1100元 | 119盒可售 |
50管/24樣 | 640元 | 96盒可售 |
更新時間:2024-06-29 16:19:22瀏覽次數:2645評價
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CAS | 詳見說明書 | 純度 | 詳見說明書 |
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分子量 | 詳見說明書 | 分子式 | 詳見說明書 |
供貨周期 | 現貨 | 規格 | 100管/48樣、50管/24樣 |
貨號 | YLK-SH103 | 應用領域 | 化工,生物產業 |
主要用途 | 科研 | 測試方法: | 微量法、紫外分光光度法 |
果膠裂解酶(pectinate lyases,PL)試劑盒說明書
微量法100T/48S
注 意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
果膠裂解酶(EC4.2.2.10)是果膠酶的重要組成部分,是一種能降解植物細胞壁,導致植物組織軟化甚至死亡的解聚酶,來源比較廣泛,主要來源于微生物,可用于果汁、果酒的澄清,提高水果出汁率,植物病毒的純化,紙漿的漂白和紡織品的生物精煉,在減少環境污染和降低能源消耗方面具有潛在的應用價值。
測定原理:
果膠裂解酶作用于果膠中的α-1,4糖苷鍵,生成在還原端C4和C5之間位置具有不飽和鍵的不飽和寡聚半乳糖醛酸,在235nm處有特征吸收峰。
自備實驗用品及儀器:
天平、低溫離心機、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、恒溫水浴鍋。
試劑組成和配制:
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體6mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體6mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:液體6mL×1瓶,4℃保存。
酶液提取:
1.組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。10000g ,4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2.細菌、真菌:按照細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后10000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。
3. 培養液:直接測定。
測定操作表:
1、 分光光度計/酶標儀預熱30min,調節波長至235nm,蒸餾水調零。
2、 操作表
對照管 | 測定管 | |
試劑一(μL) | 120 | |
試劑二(μL) | 120 | |
40℃溫育3min | ||
酶液(μL) | 20 | 20 |
混勻,40℃反應30min | ||
試劑三(μL) | 60 | 60 |
混勻于微量石英比色皿/96孔板(UV板)測定235nm處吸光值A,△A=A測定管-A對照管。 |
酶活性計算公式:
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1. 組織中PL活性
(1)按照蛋白濃度計算
酶活性定義:在40℃,pH5.5條件下,每毫克蛋白每分鐘分解果膠產生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個酶活力單位。
PL活性(nmol/min/mg prot)= △A÷(ε×d)×V反總÷(V樣×Cpr)÷T
= 64.1×△A÷Cpr
(2)按照樣本質量計算
酶活性定義:在40℃,pH5.5條件下,每克組織每分鐘分解果膠產生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個酶活力單位。
PL活性(nmol/min/g 鮮重)= △A÷(ε×d)×V反總÷(V樣×W÷V樣總)÷T
= 64.1×△A÷W
2. 細菌、真菌PL活性
酶活性定義:在40℃,pH5.5條件下,每104個細胞每分鐘分解果膠產生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個酶活力單位。
PL活性(nmol/min/104cell)= △A ÷(ε×d)×V反總÷(V樣×細胞數量÷V樣總)÷T
= 64.1×△A÷細胞數量
3. 培養液PL活性
酶活性定義:在40℃,pH5.5條件下,每毫升培養液每分鐘分解果膠產生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個酶活力單位。
PL活性(nmol/min/mL)= △A÷(ε×d)×V反總÷V樣÷T
= 64.1×△A
ε:不飽和半乳糖醛酸摩爾消光系數:5200L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V反總:反應總體積,0.2mL;V樣:反應體系中樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W,樣本質量,g;T:反應時間,30min
b. 用96孔板測定的計算公式如下
1. 組織中PL活性
(1)按照蛋白濃度計算
酶活性定義:在40℃,pH5.5條件下,每毫克蛋白每分鐘分解果膠產生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個酶活力單位。
PL活性(nmol/min/mg prot)= △A÷(ε×d)×V反總÷(V樣×Cpr)÷T
= 128.2×△A÷Cpr
(2)按照樣本質量計算
酶活性定義:在40℃,pH5.5條件下,每克組織每分鐘分解果膠產生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個酶活力單位。
PL活性(nmol/min/g 鮮重)= △A÷(ε×d)×V反總÷(V樣×W÷V樣總)÷T
= 128.2×△A÷W
2. 細菌、真菌PL活性
酶活性定義:在40℃,pH5.5條件下,每104個細胞每分鐘分解果膠產生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的
酶量為一個酶活力單位。
PL活性(nmol/min/104cell)=△A÷(ε×d)×V反總÷(V樣×細胞數量÷V樣總)÷T
= 128.2×△A÷細胞數量
3. 培養液PL活性
酶活性定義:在40℃,pH5.5條件下,每毫升培養液每分鐘分解果膠產生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個酶活力單位。
PL活性(nmol/min//mL)= △A÷(ε×d)×V反總÷V樣÷T
= 128.2×△A
ε:不飽和半乳糖醛酸摩爾消光系數:5200L/mol/cm;d:比色皿光徑,0.5cm;V反總:反應總體積,0.2mL;V樣:反應體系中樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W,樣本質量,g;T:反應時間,30min
果膠裂解酶(pectinate lyases,PL)試劑盒僅供科研!