您好, 歡迎來到化工儀器網(wǎng)! 登錄| 免費(fèi)注冊| 產(chǎn)品展廳| 收藏商鋪|
當(dāng)前位置:上海佰利萊生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>關(guān)于細(xì)胞為什么會衰老,怎么可以檢測出來
◆細(xì)胞為什么會衰老:
1、過量的大分子交聯(lián)是衰老的一個主要因素,如DNA交聯(lián)和膠原膠聯(lián)均可損害其功能,引起衰老。
2、細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累至—定量后會危害細(xì)胞,導(dǎo)致細(xì)胞的衰老。
3、自由基含有未配對電子,具有高度反應(yīng)活性,可引發(fā)鏈?zhǔn)阶杂苫磻?yīng),引起DNA、蛋白質(zhì)和脂類,尤其是多不飽和脂肪酸等大分子物質(zhì)變性和交聯(lián),損傷DNA、生物膜和重要的結(jié)構(gòu)蛋白和功能蛋白,從而引起衰老各種現(xiàn)象的發(fā)生。
4、存在于細(xì)胞內(nèi)部提供能量的線粒體,其遺傳基因很容易發(fā)生突變,變異的積累很可能是人體老化的原因之—。
細(xì)胞衰老是細(xì)胞在正常環(huán)境條件下發(fā)生的功能減退、逐漸趨向死亡的現(xiàn)象。怎么可以檢測出來細(xì)胞衰老呢?按照以下檢測方法步驟操作可以檢測出細(xì)胞衰老:
◆細(xì)胞衰老檢測方法與步驟:
(1)細(xì)胞接種前在6孔培養(yǎng)板中預(yù)先放置滅菌的細(xì)胞片,每孔加入1×10E5個細(xì)胞,37℃ 5% CO2條件下培養(yǎng)過夜,使細(xì)胞在細(xì)胞片上生長。
(2)在超凈工作臺中吸棄6孔培養(yǎng)板中的培養(yǎng)液,加入×1 PBS,洗滌細(xì)胞1次,隨后加入2%甲醛/0.2%戊二醛固定液,室溫條件下固定3~5分鐘。
(3)吸棄2%甲醛/0.2%戊二醛固定液,加入×1 PBS,洗滌細(xì)胞3次,每次3分鐘。
(4)吸棄×1 PBS,加X-Gal溶液以浸沒細(xì)胞片為宜,37℃孵育4~8小時或過夜,用保鮮膜包被6孔培養(yǎng)板以防染液蒸發(fā)。
(5)取出細(xì)胞爬片,去離子水沖洗2次,再次用固定液固定4分鐘,流水輕輕沖洗。
(6)將細(xì)胞爬片按此順序脫水、透明∶95%酒精I(xiàn)(2分鐘)→95%酒精Ⅱ(2分鐘)→100%酒精I(xiàn)(2分鐘)→100%酒精I(xiàn)(5分鐘)→二甲苯I(2分鐘)→二甲苯Ⅱ(2分鐘)。
(7)中性樹膠封片。
(8)在普通光學(xué)顯微鏡下觀察衰老細(xì)胞形態(tài)。
每張片子鏡下計(jì)數(shù)400個細(xì)胞,確定X-Gal染色陽性細(xì)胞(衰老細(xì)胞)在細(xì)胞群體中的所占的百分比即衰老細(xì)胞率(藍(lán)染細(xì)胞數(shù)/總計(jì)細(xì)胞數(shù)×100%)。
◆細(xì)胞衰老檢測注意事項(xiàng):
①X-Gal溶液需要現(xiàn)用現(xiàn)配。
②細(xì)胞固定時間過長或固定之后清洗不干凈,均會影響后續(xù)的酶反應(yīng)。
請輸入賬號
請輸入密碼
請輸驗(yàn)證碼
以上信息由企業(yè)自行提供,信息內(nèi)容的真實(shí)性、準(zhǔn)確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負(fù)責(zé),化工儀器網(wǎng)對此不承擔(dān)任何保證責(zé)任。
溫馨提示:為規(guī)避購買風(fēng)險,建議您在購買產(chǎn)品前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。