酵母質(zhì)粒提取試劑盒   核酸提取純化

產(chǎn)品貨號(hào)：26220

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

       酵母質(zhì)粒提取試劑盒   核酸提取純化采用酶法破碎酵母細(xì)胞壁和堿裂解法裂解酵母細(xì)胞來(lái)提取酵母質(zhì)粒 DNA。所采用的酵母破壁酶能有 效地破壞酵母細(xì)胞壁，提高酵母質(zhì)粒 DNA 的產(chǎn)量。吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料能高效、專(zhuān)一地吸附 DNA，可 大限度去除雜質(zhì)蛋白質(zhì)及細(xì)胞中其他有機(jī)化合物。使用酵母質(zhì)粒提取試劑盒提取的酵母質(zhì)粒 DNA 可適用于各種常規(guī)的分子 生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，包括酶切、PCR、測(cè)序、連接和轉(zhuǎn)化等試驗(yàn)。本試劑盒無(wú)需使用酚等有毒試劑，操作安全。

產(chǎn)品組成：

注意：使用前請(qǐng)先在漂洗液中加入無(wú)水乙醇，加入體積請(qǐng)參照瓶體上的標(biāo)簽。YP1 在使用前先加入 RNaseA （將 試劑盒中提供的 RNaseA 全部加入），混勻，置于 2-8 ℃保存。如非指明，所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)在 室溫下離心。

操作步驟：

1. 取 1-5ml 酵母培養(yǎng)物（不超過(guò) 5×10 7 cells），12000rpm 離心 1min，盡量吸除上清（菌液較多時(shí)可以通過(guò)多 次離心將菌體沉淀收集到一個(gè)離心管中）。

2. 酵母細(xì)胞壁的破除： A、酶法：向酵母菌體中加入 470ul 山梨醇 Buffer，充分懸浮菌體，加入 25ul 酵母破壁酶和 5ul 巰基還原劑， 充分混勻，30℃處理 1-2h，期間可顛倒離心管混勻數(shù)次。12000rpm 離心 1min，棄上清，收集沉淀。向沉淀 中加入 250ulYP1（請(qǐng)先檢查是否已加入 RNaseA），充分懸浮沉淀。注意：如果菌塊未*混勻，會(huì)影響裂 解導(dǎo)致質(zhì)粒提取量和純度偏低。 B、玻璃珠法：向酵母菌體中加入 250ul YP1（請(qǐng)先檢查是否已加入 RNaseA），充分懸浮沉淀。加入 150-200ul 酸洗玻璃珠（自備），漩渦振蕩 10min。簡(jiǎn)短離心使玻璃珠沉降到離心管底，吸取上清（如上清有所損失， 請(qǐng)用 YP1 補(bǔ)足至 250ul）于另一干凈離心管中。

3. 向離心管中加入 250ul YP2，溫和地上下翻轉(zhuǎn) 6-8 次使菌體充分裂解。注意：混勻一定要溫和，以免污染細(xì) 菌基因組 DNA，此時(shí)菌液應(yīng)變得清亮粘稠，作用時(shí)間不要超過(guò) 5 min，以免質(zhì)粒受到破壞。