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上海尚寶生物科技有限公司
初級(jí)會(huì)員 | 第4年

400-611-0007

當(dāng)前位置:上海尚寶生物科技有限公司>>試劑盒>>核酸提取純化試劑盒>> 細(xì)胞、組織核蛋白提取試劑盒

細(xì)胞、組織核蛋白提取試劑盒

參  考  價(jià):480 - 750
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 型號(hào)

  • 品牌

    其他品牌

  • 廠商性質(zhì)

    生產(chǎn)商

  • 所在地

    上海市

規(guī)格

50次 480元 9999盒 可售

100次 750元 9999盒 可售

更新時(shí)間:2021-11-29 09:52:40瀏覽次數(shù):441次

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供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50次/100次
貨號(hào) 26131 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)
細(xì)胞、組織核蛋白提取試劑盒1. 請(qǐng)?jiān)诘鞍壮樘崆叭〕?Hypotonic Buffer/Isotonic Buffer、Extraction Buffer 進(jìn)行預(yù)冷。

2. 收集細(xì)胞于 1.5ml 離心管中,3000rpm 離心去上清。估算所收集細(xì)胞體積(Packed Cell Volume,PCV)。 以下步驟以 100μL 細(xì)胞體積為例,具體實(shí)驗(yàn)可根據(jù)細(xì)胞數(shù)按相應(yīng)倍數(shù)放大。

產(chǎn)品名稱:細(xì)胞、組織核蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào):26131

操作步驟:

 產(chǎn)品信息  包裝(50次/100 次)    儲(chǔ)存條件   
 Hypotonic Buffer 35ml/70ml  4℃
Isotonic Buffer 35ml/70ml  4℃
 Extraction Buffer 3.5ml/7ml  室溫
 DTT 溶液 0.5ml/1ml  -20℃

 

1. 請(qǐng)?jiān)诘鞍壮樘崆叭〕?Hypotonic Buffer/Isotonic Buffer、Extraction Buffer 進(jìn)行預(yù)冷。

2. 收集細(xì)胞于 1.5ml 離心管中,3000rpm 離心去上清。估算所收集細(xì)胞體積(Packed Cell Volume,PCV)。 以下步驟以 100μL 細(xì)胞體積為例,具體實(shí)驗(yàn)可根據(jù)細(xì)胞數(shù)按相應(yīng)倍數(shù)放大。

3. 每 100μL PCV 加 500μL Hypotonic Buffer/Isotonic Buffer(含 DTT 及蛋白酶抑制劑),用 10μL 槍 頭輕輕吹勻 20-30 次,避免泡沫。

4. 冰上孵育 15min (每 5min 用 10μL 槍頭輕輕吹勻 20 次),4℃2000 rpm 離心 5min。

5. 用移液器吸棄上清,于沉淀中加入 200μL Hypotonic Buffer/Isotonic Buffer (含 DTT 及蛋白酶抑制 劑)。

a.將沉淀轉(zhuǎn)移至玻璃勻漿器中,冰上勻漿 5-10 次;或 b.用 1ml 注射器(5 號(hào)針頭)反復(fù)吹吸沉淀溶 液 5 次。

  可選步驟:此時(shí)可去少量樣品用臺(tái)盼藍(lán)染色液染色,未裂解的活細(xì)胞不會(huì)被染色,裂解后的可被染色。

6. 4℃12000-14000rpm 離心 20min。

7. 將上清轉(zhuǎn)移至新 1.5ml 離心管中,此上清為細(xì)胞質(zhì)蛋白,沉淀為細(xì)胞核。

8. 于沉淀中加入 70μL Extraction Buffer (含 DTT 及蛋白酶抑制劑),冰上孵育 30min,每隔 5min 輕 輕上下混勻 10 次。

9. 4℃ 12000-16000rpm 離心 10min。 10. 收集上清-20℃保存,此提取液即為細(xì)胞核蛋白。

提取:

1. 稱取 50mg 組織,將組織塊用 PBS 潤(rùn)洗,吸棄 PBS 并轉(zhuǎn)移至勻漿器中。

2. 每 50mg 組織加 500μL Hypotonic Buffer/Isotonic Buffer (含 DTT 及蛋白酶抑制劑)。

3. 冰上勻漿 15-20 次至細(xì)胞破碎。

4. 收集勻漿液,4℃ 12000-14000rpm 離心 20min。

5. 將上清轉(zhuǎn)移至新 1.5ml 離心管中,此上清為細(xì)胞質(zhì)蛋白,沉淀為細(xì)胞核。

6. 于沉淀中加入 70μL Extraction Buffer (含 DTT 及蛋白酶抑制劑),冰上孵育 30min,每隔 5min 輕 輕上下混勻 10 次。

7. 4℃ 12000-16000rpm 離心 10min。

8. 收集上清-20℃保存,此提取液即為細(xì)胞核蛋白。

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