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供貨周期 | 現貨 | 規格 | 100-150次 |
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貨號 | 10312 | 應用領域 | 醫療衛生,生物產業 |
主要用途 | 只需自備純水,即可制備高質量各種濃度的變性PAGE凝膠,方便、快捷。 |
SDS-PAGE凝膠制備試劑盒
產品編號: 10312
產品規格:100-150 次
SDS-PAGE凝膠制備試劑盒產品內容:
SDS-PAGE 凝膠制備試劑盒所提供的 APS(過硫酸銨)為固體粉末,使用前加入超純水溶解即配制成 10%APS 溶液(1.5 g APS 加 15 ml 純水),將溶液分裝后置于-20℃保存,通常半年內有效。溶液在使用中可放置 4℃ 保存一個月。
產品簡介:
SDS-PAGE 凝膠制備試劑盒包括 SDS-PAGE 凝膠制備所需全套試劑,只需自備純水,即可制備高質量各種濃度的變性 PAGE 凝膠,方 便、快捷。
注意事項:
1. 10%APS 配制后分裝-20℃保存。APS 溶液不穩定,應盡量減少室溫存放時間,每次取用后立即放回冰箱,以防 失效;若發現凝膠聚合時間延長,應考慮更換使用-20 度保存的 10%APS。
2. PAGE 凝膠的凝聚速度與溫度以及 APS、TEMED 的用量密切相關;在其它條件不變的情況下,可通過改變 APSTEMED 的用量,控制 PAGE 凝膠的聚合速度,凝膠聚合過快不利于操作;附表中的 APS 及 TEMED 量可 供參考,應根據實操作情況做適當的調整。
3. 在凝膠配制過程中,尤其是液體混勻步驟,應盡量避免氣泡的產生。
4. 在分離膠上層加純水時要小心操作,加水時速度不能太快。
5. 丙烯酰胺具有神經毒性,操作時請穿著實驗服并佩戴一次性手套。
6. 本產品僅用于科研,不能用于人體實驗或人體治療。
操作步驟:
根據目的蛋白分子量大小選擇合適的 PAGE 分離膠配制濃度,適用膠濃度請參考附表 II 灌制分離膠(各試劑使用量請參考附表 3)
1. 參照凝膠模具說明書,裝配好凝膠模具。 注:加入上層篩板有助于加樣時保持填料與樣品均勻接觸,是否加 入上層篩板可根據實際情況選擇。
2. 將不同體積的 30%Acr-Bis(29:1)、SDS-PAGE Separating Gel Buffer、SDS Buffer 和純水在小燒杯或試管中混合。
3. 加入 10%APS 和 TEMED,輕輕攪拌使其混勻,避免產生氣泡。
4. 在凝膠模具中灌入適量分離膠溶液(對于 mini-gel,凝膠液加至約距前玻璃板頂端 1.5 cm 或距梳齒約 0.5 cm 即 可),然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層 1 cm 的水層,使凝膠表面保持平整。
5. 靜置 30-60 分鐘,待分離膠和水層之間出現一個清晰的界面后,表面凝膠已聚合。
II 灌制濃縮膠(各試劑使用量請參考附表 2)
1. 去除覆蓋在分離膠上的水層。
2. 將不同體積的 30%Acr-Bis(29:1)、SDS-PAGE Stacking Gel Buffer、SDS Buffer 和純水在一個小燒杯或試管中混 合。
3. 加入 10%APS 和 TEMED,輕輕攪拌使其混勻,避免產生氣泡。
4. 將濃縮膠溶液加至分離膠的上面,直至凝膠溶液到達前玻璃板的頂端。
5. 將梳子插入凝膠內,避免產生氣泡。
6. 靜置 10~20 分鐘,等待濃縮膠聚合。
7. 待凝膠聚合后,小心地拔出梳子,以免破壞加樣孔。
8. 進行常規電泳操作。
附表 1. SDS-PAGE 分離膠的濃度與適用待測蛋白檢測范圍
SDS-PAGE分離膠濃度 | 適用待測蛋白檢測范圍 |
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8%膠 | 30-200kD |
10%膠 | 20-130kD |
12%膠 | 12-80 kD |
附表 2. 配制 5%SDS-PAGE 濃縮膠
附表 3. 配制 SDS-PAGE 分離膠
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