瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒

產品貨號：27101

產品規格：200 次

產品簡介：

       瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒采用新型硅基質膜技術和試劑配方，通過*的離心吸附柱快速的結合 DNA-洗滌-洗脫步驟即可從 普通或低熔點瓊脂糖凝膠中回收純化 70 bp-30 kb 的 DNA 的片段，溶膠速度快，回收率高。溶膠液中含有 pH 指示 劑，可根據顏色來判斷溶膠回收是否達到適用狀態。每個吸附柱可吸附高達 10μg 的 DNA，同時有效去除引物、 酶、礦物油、瓊脂糖等雜質。純化回收的 DNA 純度及濃度高，完整性好，可直接用于測序、連接和轉化、標記、 體外轉錄等分子生物學實驗。

產品內容：

自備試劑：

  使用前 Buffer PW 50 次加入 36ml 無水乙醇/100 次加入 72ml 無水乙醇/200 次加入 144ml 無水乙醇。

操作步驟：

1. 將單一目的 DNA 條帶從瓊脂糖凝膠中切下（盡量切除多余部分），放入干凈的離心管（自備）中，稱量計 算凝膠重量（提前記錄離心管重量）。

2. 注意：若膠塊的體積過大，可將膠塊切成碎塊。

3. 向膠塊中加入 2 倍體積 Buffer PG（如凝膠重為 100 mg，其體積可視為 200μl，依此類推）。

4. 57℃水浴溫育，其間每隔 2-3 分鐘溫和地上下顛倒離心管，待溶膠液為黃色，以確保膠塊充分溶解。如果還 有未溶的膠塊，可再補加一些溶膠液或繼續放置幾分鐘直至膠塊*溶解。

5. （可選步驟）當回收片段<300 bp 時，應加入 1/2 膠體積的異丙醇，上下顛倒混勻（如凝膠重 100 mg，則加 入 50μl 的異丙醇）。

6. 柱平衡：向已裝入收集管（Collection Tubes）中的吸附柱（Spin Columns）中加入 200μl Buffer PS，12000 rpm 離心 1 分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

7. 將步驟 3 或 4 所得溶液加入到已裝入收集管的吸附柱中，室溫放置 2 分鐘，12000 rpm 離心 1 分鐘，倒掉收 集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。

8. 注意：吸附柱容積為 750μl，若樣品體積大于 750μl 可分批加入。

9. 向吸附柱中加入 450 μl Buffer PW（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12000 rpm 離心 1 分鐘，倒掉收 集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。

10. 注意：如果純化的 DNA 用于鹽敏感的實驗（例如平末端連接或直接測序），建議加入 Buffer PW 靜置 2-5 分鐘再離心。

11. 重復步驟 7。

12. 12000 rpm 離心 1 分鐘，倒掉收集管中的廢液。

13. 注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除，乙醇的殘留會影響后續的酶促反應（酶切、PCR 等）。

14. 將吸附柱放到一個新的 1.5 ml 離心管（自備）中，向吸附膜中間位置懸空滴加 50μl Buffer EB，室溫放置 2 分鐘。12000 rpm 離心 1 分鐘，收集 DNA 溶液。-20℃保存 DNA。

注意：

1. 為了提高 DNA 的回收量，可將離心得到的溶液重新滴加到吸附柱中，室溫放置 2 分鐘，12000 rpm 離心 1 分鐘。

2. 洗脫體積不應小于 30μl，體積過少會影響回收效率。

3. 回收大于 10 kb 的 DNA的 片段時，Buffer EB 應在 57℃水浴中預熱，可增加回收效率。

備注：

     瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒也適用于 PCR 產物的純化回收。在 PCR 反應液中加入等體積的 Buffer PG，充分混勻（對于回收小 于 150bp 的小片段可將溶液的體積增加到 3 倍以提高回收率）接上述步驟 5 進行后續操作。

注意事項：

1. *使用前應按照試劑瓶標簽的說明在 Buffer PW 中加入無水乙醇。

2. 使用前請檢查 Buffer PG，如果出現結晶或者沉淀，可在 37℃水浴中放置 3-5 分鐘，即可恢復澄清。

3. 電泳時建議使用新的電泳緩沖液，避免影響電泳和回收效果；如下一步實驗要求較高，請盡量使用 TAE 電 泳緩沖液。

4. 切膠時，紫外照射時間應盡量短，以免對 DNA 造成損傷。

5. 回收率與初始 DNA 量和洗脫體積有關，初始量越少，洗脫體積越少，回收率越低。

6. 將水浴鍋預熱至 57℃。

7. 所有離心步驟均可室溫下進行。