DNA 含量檢測試劑盒（細胞周期）

產品貨號：26350

產品規格：50T

DNA含量檢測試劑盒（細胞周期）產品簡介：

  細胞周期是指連續分裂細胞從一次有絲分裂結束到下一次有絲分裂結束所經歷的整個過程。在這個過程中， 細胞遺傳物質復制并加倍，且在分裂結束時平均分配到兩個子細胞中去。細胞周期又可以分為間期和有絲分裂期， 細胞間期常劃分為休眠期（G0），DNA合成前期（G1），DNA合成期（S），DNA合成后期（G2），整個周期 可表示為G1→S→G2→M。DNA周期檢測可用來反應細胞周期的各個期的狀況，即細胞增殖狀況。利用細胞內 DNA能夠和熒光染料（如碘化丙啶PI）結合的特性，細胞各個時期其DNA含量不同從而結合的熒光染料不同，流 式細胞儀檢測的熒光強度也不一樣。

  細胞發生凋亡時，由于胞漿和染色質濃縮，核裂解，產生凋亡小體，使細胞的光散射性質發生變化。在細胞 凋亡的早期，細胞對前向角光散射的能力顯著降低，對90°角光散射的能力增加或沒有變化。在細胞凋亡的晚期， 前向角和90°角光散射的信號均降低。因此可以通過流式細胞儀測定細胞光散射的變化來觀察凋亡細胞。用PI對 細胞進行染色，凋亡細胞由于總DNA量降低，于正常G0/G1細胞群前出現DNA低染細胞群，即G1峰前出現亞二 倍體峰（sub-G1）,即細胞凋亡群。

本試劑盒可應用于培養細胞（懸浮、貼壁）的DNA含量（細胞周期）檢測。

產品內容:

操作步驟（僅供參考）：

1. 用適當的方法誘導細胞凋亡，同時設立陰性對照組，并收集細胞。

2. 用PBS洗滌細胞一次，1500rpm，5min離心收集，調整細胞濃度為 1×10 6 /ml,取1ml單細胞懸液。

3. 制備的單細胞懸液離心后，去除上清，在細胞中加入70%預冷乙醇500ul固定2小時至過夜，4℃保存，染色前 用PBS洗去固定液；如需要，細胞懸液可用200目細胞篩網過濾一次。

4. 細胞沉淀中加100µl RNase A溶液，重懸細胞，37℃水浴30min。

5. 再加入400µl PI染色液混勻，4℃避光孵育30min。

6. 上機檢測，記錄激發波長488nm處紅色熒光。

注意事項：

1. 碘化丙啶（PI）染色液保存和使用過程中應注意避光。

2. PI有毒，操作時應戴手套，并避免污染。

3. 熒光染料都存在淬滅問題，建議染色后盡量當天完成檢測。