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50次 200元 999盒 可售
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更新時(shí)間:2021-08-23 10:52:38瀏覽次數(shù):244次
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貨號(hào) | 26210 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
高純度質(zhì)粒小提試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào):26210
產(chǎn)品規(guī)格:50次/100次/200次
產(chǎn)品簡介:
高純度質(zhì)粒小提試劑盒適合提取1-5 ml菌液,在堿裂解法裂解細(xì)胞的基礎(chǔ)上,采用*的硅基質(zhì)膜吸附技術(shù)和試劑配方,通過離心吸附柱在高鹽狀態(tài)下高效專一的結(jié)合溶液中的質(zhì)粒DNA,每個(gè)吸附柱最高可吸附30 μg的質(zhì)粒DNA,并最大限度的去除蛋白質(zhì)、基因組、RNA和其他雜質(zhì)。得到的質(zhì)粒DNA可直接用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染、PCR、酶切、測序、連接等生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
包裝清單:
自備試劑:使用前Buffer PE 50次加入36ml無水乙醇/100次加入72ml無水乙醇/200次加入144ml無水乙醇
操作步驟:
1. 取-5 ml過夜培養(yǎng)的菌液加入離心管(自備)中,12000 rpm離心30秒收集菌體沉淀,盡量吸棄上清。
2. 向留有菌體沉淀的離心管中加入250μl Buffer P1,使用移液器或渦旋振蕩器充分混勻,懸浮菌體沉淀。
注意:如果菌塊未*混勻,將會(huì)影響裂解效果,導(dǎo)致提取量和純度偏低。
3. 向離心管中加入250μl Buffer P2,溫和地上下顛倒混勻4-6次,充分混勻使菌體裂解,此時(shí)溶液應(yīng)變得清亮粘稠。
注意:溫和混勻,不要?jiǎng)×艺鹗帲悦獯驍嗷蚪MDNA,造成提取的質(zhì)粒中混有基因組DNA片段。
4. 此步驟所用時(shí)間應(yīng)不超過5分鐘,避免質(zhì)粒受到破壞。
5. 向離心管中加入350μl Buffer N3,立即溫和地上下顛倒混勻8-10次,充分混勻,此時(shí)應(yīng)出現(xiàn)白色絮狀沉淀。12000 rpm離心5分鐘。
注意:Buffer N3加入后應(yīng)立即混勻,避免產(chǎn)生局部沉淀。
6. 將步驟4中所得的上清液轉(zhuǎn)移到已裝入收集管的吸附柱(Spin Columns)中,12000 rpm離心30秒鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。
7. 向吸附柱中加入500μl Buffer PB,12000 rpm離心30秒。
8. 向吸附柱中加入750μl Buffer PE(請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇),12000 rpm離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液。
9. 將吸附柱置于一個(gè)新的離心管(自備)中,向吸附膜的中間部位加入50μl BufferEB,室溫放置1分鐘,12000 rpm離心1分鐘,將質(zhì)粒溶液收集到離心管中。-20℃保存質(zhì)粒。
注意:
1. 為了增加質(zhì)粒的回收效率,可將得到的溶液重新加入到吸附柱中,室溫放置2分鐘,12000 rpm離心1分鐘,將質(zhì)粒溶液收集到離心管中。
2. 質(zhì)粒拷貝數(shù)較低或>10 kb時(shí), Buffer EB在65~70℃水浴預(yù)熱,可以增加提取效率。
注意事項(xiàng):
1. 前若發(fā)現(xiàn)Buffer P2、Buffer N3、Buffer PB有沉淀,可在37℃水浴幾分鐘,即可恢復(fù)澄清(請(qǐng)勿劇烈晃動(dòng)Buffer P2)。
2. 第一次使用前應(yīng)按照說明在Buffer PE中加入144ml無水乙醇。
3. 注意不要直接接觸Buffer P2 、Buffer N3和 Buffer PB,使用后應(yīng)立即蓋緊蓋子。
4. 提取質(zhì)粒的量和純度與細(xì)菌培養(yǎng)濃度、菌株種類、質(zhì)粒大小、質(zhì)粒拷貝數(shù)等因素有關(guān)。
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