柱式細胞基因組提取試劑盒

產品貨號：28104

產品規格：50次/100次/200次

產品簡介：

　  柱式細胞基因組提取試劑盒適合于從哺乳動物細胞中提取高純度總DNA。本品可純化獲得分子量最大為50 kb的DNA片段，純化過程不需使用苯酚或氯仿等有毒溶劑，無需乙醇沉淀。本試劑盒采用優化的緩沖體系使裂解液中的DNA高效特異的結合到硅基質離心吸附柱上，PCR和其他酶促反應的抑制劑可通過兩步洗滌步驟被有效去除，最后使用低鹽緩沖液或水洗脫，即可得到高純度DNA。純化得到的DNA可以直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文庫構建、Southern Blot、分子標記等下游實驗。

包裝清單：

自備試劑：使用前Buffer PW 50次加入36ml無水乙醇/100次加入72ml無水乙醇/200次加入144ml無水乙醇。

操作步驟：

材料處理：

1. 貼壁培養的細胞應先處理為細胞懸液（最大提取量為5×10⁶個細胞），2000rpm（400×g）離心5分鐘，棄盡上清，加200 μl Buffer GL，振蕩至樣品*懸浮。

2. 如需去除RNA，可在上述步驟完成后，加入4μl的濃度為100 mg/ml的RNase A溶液，渦旋15秒。劇烈渦旋震蕩并用移液器吹打充分混勻，室溫放置5-10分鐘。

3. 柱平衡：向已裝入收集管（Collection Tubes）中的吸附柱（Spin Columns）中加入200μl Buffer PS，12000 rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

4. 將步驟3所得溶液短暫離心，全部加入到已裝入收集管的吸附柱（Spin Columns）中，若一次不能加完溶液，可分多次轉入。12000 rpm離心1min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

5. 向吸附柱中加入450 μl Buffer PW（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12000 rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。  注意：如果純化的DNA用于鹽敏感的實驗（例如平末端連接或直接測序），建議加入Buffer PW靜置2-5分鐘再離心。

6. 重復步驟5。

7. 12000 rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液。

注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除，乙醇的殘留會影響后續的酶促反應（酶切、PCR等）。8.將吸附柱放到一個新的1.5 ml離心管（自備）中，向吸附膜中間位置懸空滴加50μl Buffer EB，室溫放置2分鐘。12000 rpm離心1分鐘，收集DNA溶液。-20℃保存DNA。

注意：1）洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液，應保證其pH值在7.0-8.5之間（可以用NaOH將水的pH值調到此范圍）。2）為了提高基因組提取量，可將離心得到的溶液重新加到吸附柱中，室溫放置2分鐘，12000 rpm離心1分鐘。3）洗脫體積不應小于30μl，體積過少會影響回收效率。

注意事項 ：

1. 第一次使用前應按照試劑瓶標簽的說明在Buffer PW中加入無水乙醇。

2. 所有離心步驟均可室溫下進行。