λ噬菌體基因組DNA提取試劑盒（PEG沉淀法）

產(chǎn)品貨號：11137

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡介：

λ噬菌體是最早使用的克隆載體，其基因組是長度約為50kb的雙鏈DNA分子，其在宿主細(xì)胞由兩種生活途徑：1、裂解生長：環(huán)狀DNA分子在細(xì)胞內(nèi)多次復(fù)制，合成大量噬菌體基因產(chǎn)物，裝配成噬菌體顆粒，裂解宿主菌再進(jìn)行下一次感染；2、溶源性生長：感染細(xì)胞內(nèi)λ噬菌體DNA整合到宿主菌染色體DNA中與之一起復(fù)制，并遺傳給子代細(xì)胞，宿主細(xì)胞不裂解。科研人員常常利用λ噬菌體裂解生長的特點，培養(yǎng)獲取大量的λ噬菌體顆粒，并提取λ噬菌體DNA。噬菌體載體廣泛用于文庫篩選，目的克隆培養(yǎng)獲得大量的噬菌體顆粒需要提取λ噬菌體DNA來開展測序等后續(xù)工作。λ噬菌體裂解培養(yǎng)物離心后的上清，首先用RNase A /DNase混合酶消化去除殘留的宿主菌DNA/RNA，沉淀收集噬菌體，通過酚異戊醇等提取，殘留碎片通過沉淀離心去除，通過一系列快速的漂洗、離心的步驟，將鹽、細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除，獲得 DNA 的量很高，但是純度一般，但是足夠用于大

多數(shù)分子生物學(xué)實驗。

尚寶λ噬菌體基因組DNA提取試劑盒(PEG沉淀法)是簡便的λ噬菌體基因組DNA的試劑盒，其提取原理是通過 PEG沉淀、酚異戊醇等提取，殘留碎片通過沉淀離心去除，通過一系列快速的漂洗、離心步驟，將鹽、細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除，即可獲得λ噬菌體基因組DNA，可進(jìn)行酶切、PCR等下游實驗。僅用于科研領(lǐng)域，不用于臨床診斷或治療。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1. 離心管

2. 低溫離心機(jī)、搖床

3. 70%乙醇

操作步驟（僅供參考）：  以下操作以10ml噬菌體感染細(xì)菌培養(yǎng)上清液為例。

1. 準(zhǔn)備工作：向RNase A和DNase I分別加入1ml的TE buffer吹打，顛倒混勻，充分溶解RNase A和DNase I后，按照每次使用量分裝-20℃凍存，6個月有效。

2. 將0.1～0.5%氯仿處理后的λ噬菌體感染的12ml液體培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移至離心管，8000～10000g離心10min，去除細(xì)菌碎片，取上清液。一般建議8000g離心，如果效果不佳可以考慮10000g，但轉(zhuǎn)速過高容易導(dǎo)致噬菌體也沉淀至管底，降低產(chǎn)量。

3. 取10ml上清液，加入5μl RNase A和10μl DNase I，充分混勻，37℃培養(yǎng)30min。

注意：噬菌體培養(yǎng)上清液會因生長和裂解情況不同致使殘留的RNA/DNA量不液不同，RNase/DNase消化過度，可能減少產(chǎn)量；消化不*，DNA、RNA可粘走部分噬菌體，一般RNase可以進(jìn)行調(diào)整，可根據(jù)實際情況適當(dāng)調(diào)節(jié)用量和消化時間。

4. 向上清液中加入4ml噬菌體沉淀液，搖勻至溶解，冰浴1h或4℃過夜。

5. 4℃ 10000g 離心20min，棄上清液。

6. 加入1ml SM buffer充分清洗管壁及沉淀，轉(zhuǎn)移至新的離心管或微量離心管，加入40μl噬菌體裂解液，68℃培養(yǎng) 15min。

7. 加入等體積蛋白清除液，輕輕混勻，12000g離心5min，取上清液。

8. （備選步驟）轉(zhuǎn)移上清液至新的離心管中，加入等體積預(yù)冷的噬菌漂洗液，輕輕混勻，-20℃孵育1h，4℃ 12000g 離心10min，棄上清液。

9. 加入適量的70%乙醇溶液，混勻，4℃ 8000g離心8min，棄上清液。如果有必要，可以重復(fù)1次該清洗步驟。

10. 室溫自然干燥DNA，加入適量TE buffer，-20℃保存。TE buffer體積越大，DNA濃度越低。

注意事項：

1. 用于裂解的噬菌體、宿主菌越新鮮，裂解越好、收獲量越大。

2. 液體培養(yǎng)裂解時，到了時間裂解還沒發(fā)生，可適當(dāng)?shù)奶岣邷囟然蚣哟笳駬u速度。

3. RNase/DNase消化過度，可能減少產(chǎn)量；消化不*，可粘走部分噬菌體。

4. 噬菌體裂解液在低溫下易結(jié)晶析出白色物質(zhì)，可37℃溫浴至*溶解。

有效期：6個月有效。