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革蘭氏陽性菌基因組DNA提取試劑盒

參  考  價:320 - 580
具體成交價以合同協議為準
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    其他品牌

  • 廠商性質

    生產商

  • 所在地

    上海市

規格

50T 320元 999盒可售

100T 580元 999盒可售

更新時間:2021-11-30 09:37:06瀏覽次數:265次

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供貨周期 現貨 規格 50T/100T
貨號 26228 應用領域 化工,生物產業
革蘭氏陽性菌基因組DNA提取試劑盒采用可以特異性結合DNA的離心吸附柱和*的緩沖液系統,提取革蘭氏陽性菌基因組DNA。離心吸附柱中采用的硅基質材料為本公司*新型材料,能夠高效專一吸附DNA,可最大限度去除雜質蛋白及細胞 中其他有機化合物。提取的基因組DNA片段大,純度高,質量穩定可靠。使用本試劑盒提取的基因組DNA可用于各種常規操作,包括酶切、 PCR、文庫構建、Southern雜交等實驗。
  產品貨號:26228
 
  產品規格:50T/100T
 
  產品簡介:
 
  本試劑盒采用可以特異性結合DNA的離心吸附柱和*的緩沖液系統,提取革蘭氏陽性菌基因組DNA。離心吸附柱中采用的硅基質材料為本公司*新型材料,能夠高效專一吸附DNA,可最大限度去除雜質蛋白及細胞中其他有機化合物。提取的基因組DNA片段大,純度高,質量穩定可靠。使用本試劑盒提取的基因組DNA可用于各種常規操作,包括酶切、 PCR、文庫構建、Southern雜交等實驗。
 
  產品組成:
 
  試劑名稱 50T 100T溶菌酶 0.3g 0.5gRNase A 1ml 1ml×2蛋白酶 K 1ml 1ml×2溶液 A 10ml 20ml溶液 B 10ml 20ml漂洗液 15ml 15ml×2洗脫液 15ml 30ml吸附柱 50 個 100 個收集管 50 個 100 個操作步驟:使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇,加入體積請參照瓶體上的標簽。所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。
 
  1. 取細菌培養液 1ml,12000rpm 離心 1min.,盡量吸除上清。
 
  2. 向菌體中加入 200ul 終濃度為 20mg/ml 的溶菌酶,用溶菌酶干粉加入緩沖液 20 mM Tris, pH 8.0;2 mMNa2-EDTA;1.2% Triton X-100,37℃處理 30min 以上。(如果需要去除 RNA,可加入 20ul RNase A(10mg/ml)溶液)
 
  3. (可選作)向上述溶液中加入 200ul 溶液 A,振蕩或用移液器吹打使菌體充分懸浮,室溫放置 30min-60min。
 
  4. 向管中加入 20ul 的蛋白酶 K (10mg/ml),充分混勻,55℃消化 30-60min,消化期間可顛倒離心管混勻數次,直至樣品消化*為止,此時可見菌液呈清亮粘稠狀。
 
  5. 向管中加入 200ul 溶液 B,充分顛倒混勻,如出現白色沉淀,可于 75℃放置 15-30min,沉淀即會消失,不影響后續實驗。如果溶液未變清亮,說明樣品消化不*,可能會導致 DNA 的提取量以及純度降低,還可能堵塞吸附柱。
 
  6. 向管中加入 200ul 無水乙醇,充分混勻,此時還可能會出現絮狀沉淀,不影響 DNA 的提取,可將溶液和絮狀沉淀都加入到吸附柱中,靜置 2min。
 
  7. 12000rpm 離心 2min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
 
  8. 向吸附柱中加入 600ul 漂洗液(使用前請先檢查是否己加入無水乙醇)。12000rpm 離心 1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
 
  9. 向吸附柱中加入 600ul 漂洗液,12000rpm 離心 l min, 棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
 
  10. 12000rpm 離心 2min,將吸附柱敞口置于室溫或 50℃溫箱放置數分鐘,目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,否則漂洗液中的乙醇會影響后續實驗如酶切、PCR 等。
 
  11. 將吸附柱放入一個干凈的離心管中,向吸附膜中央懸空滴加 50-200ul 經 65℃水浴預熱的洗脫液,室溫放置5min,12000rpm 離心 1min。
 
  12. 離心所得洗脫液再加入吸附柱中,室溫放置 2min ,12000rpm 離心 2min,即可得到高質量的細菌基因組 DNA。
 
  注意事項:
 
  1. 樣品應避免反復凍融,否則會導致提取的 DNA 片段較小且提取量下降。
 
  2. 若試劑盒中的溶液出現沉淀,可在 65℃水浴中重新溶解后再使用,不影響提取效果。
 
  3. 如果實驗中的離心步驟出現柱子堵塞的情況,可適當延長離心時間。
 
  4. 洗脫緩沖液的體積最好不少于 50ul,體積過小會影響回收效率;洗脫液的 pH 值對洗脫效率也有影響,若需要用水做洗脫液應保證其 pH 值在 8.0 左右(可用 NaOH 將水的 pH 值調至此范圍), pH 值低于 7. 0 會降低洗脫效率。DNA 產物應保存在-20℃,以防 DNA 降解。
 
  5. DNA 濃度及純度檢測:得到的基因組 DNA 片段的大小與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關。回收得到的 DNA 片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。DNA 應在 OD260處有顯著吸收峰,OD260 值為 1.0 相當于大約 50μg/ml 雙鏈 DNA、40μg/ml 單鏈 DNA。OD260/0D280 比值應為 1.7-1.9,如果 洗脫時不使用洗脫緩沖液,而使用去離子水,比值會偏低,因為 pH 值和離子存在會影響光吸收值,但并不 表示純度低。
 
  保存條件:
 
  室溫(15-25℃) 干燥保存,復檢期 12 個月,2-8℃保存時間更長。

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