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供貨周期 | 現貨 | 規格 | 50T/100T |
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貨號 | 26230 | 應用領域 | 化工,生物產業 |
酵母基因組DNA提取試劑盒產品貨號:26230產品規格:50T/100T產品簡介:本試劑盒采用可以特異性結合DNA的離心吸附柱和*的緩沖液系統,提取酵母基因組DNA。離心吸附柱中采用的硅基質材料為本公司*新型材料,能夠高效專一吸附DNA,可最大限度去除雜質蛋白及細胞中其他有機化合物。提取的基因組DNA片段大,純度高,質量穩定可靠。使用本試劑盒提取的基因組DNA可用于各種常規操作,包括酶切、PCR、文庫構建、Southern雜交等實驗。產品組成:試劑盒內容 50T 100T 保存條件RNaseA 1ml 1ml×2 -20℃蛋白酶K 1ml 1ml×2 -20℃酵母破壁酶 1.25ml 1.25ml×2 -20℃巰基還原劑 300μL 600μL -20℃山梨醇Buffer 25ml 50ml 室溫溶液A 10ml 20ml 室溫溶液B 10ml 20ml 室溫漂洗液 15ml 30ml 室溫洗脫液 15ml 30ml 室溫吸附柱 50個 100個 室溫收集管 50個 100個 室溫操作步驟 (僅供參考) :使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇,加入體積請參照瓶體上的標簽。所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。1. 取酵母細胞不超過5×107 cell s),12000rpm離心1min,盡量吸除上清。2. 酵母細胞壁的破除:向酵母菌體中加入470ul山梨醇Buffer。充分懸浮菌體,加入25ul酵母破壁酶和5ul巰基還原劑,充分混勻。30℃處理 2h,期間可顛倒離心管混勻數次。3. 12000rpm離心lmin,棄上清,收集沉淀。4. 向沉淀中加入200ul溶液 ,充分懸浮沉淀,向懸浮液中加入20ul的RNase A(10mg/ml),充分顛倒混勻,室溫放置 10min。5. 加入20ul的蛋白酶K(10mg/ml),充分顛倒混勻。65℃水浴消化15-30min,消化期間可顛倒離心管混勻數次,直至樣品消化*為止。6. 加入200ul溶液,再加入200ul無水乙醇,充分顛倒混勻,此時可能會出現絮狀沉淀,不影響DNA的提取,可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中,室溫放置2min。7. 12000rpm離心2min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。8. 向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前請先檢查是否己加入無水乙醇)。12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。9. 向吸附柱中加入600ul漂洗液,12000rpm離心1min, 棄廢液,將吸附柱放入收集管中。10. 12000rpm離心2min,將吸附柱敞口置于室溫或50℃溫箱放置數分鐘,目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,否則漂洗液中的乙醇會影響后續實驗如酶切、PCR等。11. 將吸附柱放入一個干凈的離心管中,向吸附膜中央懸空滴加50-200ul經65℃水浴預熱的洗脫液,室溫放置5min, 12000rpm離心1min。12. 離心所得洗脫液再加入吸附柱中,12000rpm離心2min,即可得到高質量的基因組DNA。注意事項:1. 樣品應避免反復凍融,否則會導致提取的 DNA 片段較小且提取量下降。2. 若試劑盒中的溶液出現沉淀,可在 65℃水浴中重新溶解后再使用,不影響提取效果。3. 如果實驗中的離心步驟出現柱子堵塞的情況,可適當延長離心時間。4. 洗脫緩沖液的體積最好不少于 50ul,體積過小會影響回收效率;洗脫液的 pH 值對洗脫效率也有影響,若需要用水做洗脫液應保證其 pH 值在 8.0 左右可用 NaOH 將水的 pH 值調至此范圍,pH 值低于 7. 0 會降低洗脫效率。 DNA 產物應保存在-20℃,以防 DNA 降解。5. DNA 濃度及純度檢測:得到的基因組 DNA 片段的大小與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關。回收得到的 DNA 片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。DNA 應在 OD260處有顯著吸收峰,OD260值為 1.0 相當于大約 50μg/ml 雙鏈 DNA、40μg/ml 單鏈 DNA。OD260/0D280比值應為 1.7-1.9,如果洗脫時不使用洗脫緩沖液,而使用去離子水,比值會偏低,因為 pH 值和離子存在會影響光吸收值,但并不表示純度低。有效期:室溫干燥保存,復檢期 12 個月,2~8℃保存時間更長。
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