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上海尚寶生物科技有限公司
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質粒大量提取試劑盒

參  考  價:290
具體成交價以合同協議為準
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    其他品牌

  • 廠商性質

    生產商

  • 所在地

    上海市

規格

10T 290元 999盒可售

更新時間:2021-08-26 16:04:39瀏覽次數:270次

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供貨周期 現貨 規格 10T
貨號 26243 應用領域 化工,生物產業
質粒大量提取試劑盒采用堿裂解法裂解細胞,根據離心吸附柱在高鹽狀態下特異性地結合溶液中的DNA的原理特異性提取質粒DNA。離心吸附柱中采用的硅基質材料能高效、專一地吸附DNA,可最大限度去除雜質蛋白及細胞中其他有機化合物,一般從50-100ml大腸桿菌LB培養液中,可快速提取200-300μg高純度高拷貝的質粒DNA,提取率達85-90%。

質粒大量提取試劑盒 


產品貨號:26243 

產品規格:10T 

產品簡介:本試劑盒采用堿裂解法裂解細胞,根據離心吸附柱在高鹽狀態下特異性地結合溶液中的DNA的原理特異性提取質粒DNA。離心吸附柱中采用的硅基質材料能高效、專一地吸附DNA,可最大限度去除雜質蛋白及細胞中其他有機化合物,一般從50-100ml大腸桿菌LB培養液中,可快速提取200-300μg高純度高拷貝的質粒DNA,提取率達85-90%。 使用本試劑盒提取的質粒DNA可適用于各種常規操作,包括酶切、PCR、測序、 連接和轉化等試驗。使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇,加入體積請參照瓶體上的標簽。溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA(將試劑盒中提供的RNaseA全部加入),混勻,置于2-8℃保存。如非指明,所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。產品組成:試劑名稱 10TRNaseA ( 10mg/ml ) 1ml溶液Ⅰ 60ml溶液Ⅱ 60ml溶液Ⅲ 80ml漂洗液 2×15ml洗脫液 30ml吸附柱 10 個收集管(50ml) 10 個

 操作步驟: 

  1. 收集 50-100ml 過夜培養的菌液 11000rpm 離心 10 分鐘,盡量吸除上清(菌液較多時可以通過多次離心將菌體沉淀收集到一個離心管中)。

    2. 向留有菌體沉淀的離心管中加入 5ml 溶液Ⅰ (請先檢查是否已加入 RNaseA) ,使用移液器或渦旋振蕩器*懸浮細菌細胞沉淀。注意:如果菌塊未*混勻,會影響裂解導致質粒提取量和純度偏低。

  2. 3. 向離心管中加入 5ml 溶液Ⅱ,溫和地上下翻轉 6-8 次使菌體充分裂解。

    注意:

    ①翻轉一定要溫和,以免污染細菌基因組 DNA。

    ②作用時間不要超過 5 分鐘,以免質粒受到破壞。

    4. 向離心管中加入 7ml 溶液Ⅲ ,立即溫和地上下翻轉 6-8 次,充分混勻,此時會出現白色絮狀沉淀(如菌液過多,可在此步放置 5 分鐘,以盡可能的降解 RNA)。11000rpm 離心 10 分鐘,用移液器小心地將上清轉移到另一個干凈的離心管中,注意盡量不要吸出沉淀。

    注意:溶液Ⅲ加入后應立即混勻,避免產生局部沉淀。 如果上清中還有微小白色沉淀,可再次離心后取上清。

    5. 將上一步所得上清液加入吸附柱中(吸附柱放入收集管中),室溫放置 2-3 分鐘,11000rpm 離心 30-60 秒,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中(如為提高得率,可將收集管中的液體加入吸附柱再次吸附一次)。6. 向吸附柱中加入 8ml 漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),11000rpm 離心 2min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。

    7. 向吸附柱中加入 6ml 漂洗液,11000rpm 離心 2min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。8. 11000rpm 離心 5min,將吸附柱敞口置于室溫或 50℃溫箱放置數分鐘,目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,否則漂洗液中的乙醇會影晌后續的實驗如酶切、PCR 等。

    9. 將吸附柱放入一個干凈的離心管中,向吸附膜中央懸空滴加 1-2ml 經 65℃水浴預熱的洗脫液,室溫放置 5min,11000rpm 離心 2min,收集質粒溶液用于后續實驗。

    10. 為了增加質粒的回收效率,可將得到的洗脫液重新加入吸附柱中,室溫放置 5min,11000rpm 離心 2min。

    注意事項:

    1. 使用前請先檢查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出現混濁,如有混濁現象,可在 37℃水浴中加熱幾分鐘,待溶液恢復澄清后再使用。溶液Ⅱ、溶液Ⅲ和漂洗液使用后應立即擰緊蓋子。

    2. 洗脫緩沖液體積不應少于 500ul,體積過小影響回收效率;洗脫液的 pH 值對洗脫效率也有影晌,若需要用水做洗脫液應保證其 pH 值在 8.0 左右(可用 NaOH 將水的 pH 值調至此范圍), pH 值低于 7. 0 會降低洗脫效率。 DNA 產物應保存在-20℃,以防 DNA 降解。

    3. 如果所提質粒為低拷貝質粒或大于 10kb 的大質粒,應加大菌體使用量,使用 400-800ml 過夜培養物,同時按照比例增加溶液Ⅰ、溶液Ⅱ和溶液Ⅲ的用量,吸附和洗脫時可以適當的延長時間,以增加提取效率。

    4. DNA 濃度及純度檢測:得到的質粒 DNA 純度與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關。得到的DNA 可用瓊脂糖疑膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。DNA 應在 OD260 處有顯著吸收峰,OD260 值為 1 相當于大約 50μg/ml 雙鏈 DNA、 40μg/ml 單鏈 DNA。OD260/OD280 比值應為 1.7-1.9,如果洗脫時不使用洗脫緩沖液,而使用去離子水,比值會偏低,因為 pH 值和離子存在會影響吸光值,但并不表示純度低。

    保存條件:常溫保存,復檢期一年。



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