| 供貨周期 |
現貨 |
規格 |
50T/100T |
| 貨號 |
10262 |
應用領域 |
化工,生物產業 |
尚寶生物 組織線粒體分離試劑盒（Tissue Mitochondria Isolation Kit）是快速便捷分離動物組織中的線粒體的試劑盒，分離線粒體的同時可以獲得去除線粒體的細胞漿蛋白，可用于分析細胞色素C等線粒體蛋白向胞漿的釋放，大部分獲得的線粒體都含有完整的內膜和外膜，并具有線粒體的生理功能（如檢測線粒體膜電位），獲得的蛋白可用于SDS-PAGE、Western、雙向電泳等蛋白分析。
產品貨號：10262
產品規格：50T/100T
產品簡介：
線粒體是細胞呼吸的主要場所，細胞活動所需的能量主要由在線粒體內進行的氧化所產生的能量來供應。制備線粒體的關鍵是保持線粒體的完整性和純度，可通過分級分離法獲得，即先低俗出去細胞核以及細胞碎片，再進行高速梯度離心分離線粒體。
尚寶生物 組織線粒體分離試劑盒(Tissue Mitochondria Isolation Kit)是快速便捷分離動物組織中的線粒體的試劑盒，分離線粒體的同時可以獲得去除線粒體的細胞漿蛋白，可用于分析細胞色素C等線粒體蛋白向胞漿的釋放，大部分獲得的線粒體都含有完整的內膜和外膜，并具有線粒體的生理功能(如檢測線粒體膜電位)，獲得的蛋白可用于SDS-PAGE、Western、雙向電泳等蛋白分析。
該試劑盒可用于從動物軟組織(如腦、肝臟)和硬組織(心肌、骨骼肌)中提取線粒體，對于采用該試劑盒提取硬組織線粒體效果不佳者，建議采用 尚寶生物硬組織線粒體分離試劑盒。該試劑盒僅用于科研領域，不宜用于臨床診斷或其他用途。產品組成：試劑名稱 50T 100T 保存條件試劑(A): Mitochondria Lysis buffer 100ml 200ml -20℃試劑(B): Mitochondria Stock buffer 10ml 20ml -20℃試劑(C): Protein Stock buffer (5×) 10ml 20ml 室溫試劑(D): PMSF(100×) 1.5ml 3ml -20℃
自備材料：
1. 低溫離心機、勻漿器
2. PBS
操作步驟：
1. 清洗：取新鮮組織(不宜采用凍存的組織)，迅速稱重50～100mg，用預冷的PBS清洗1次，冰上剪成3mm2大小的組織碎片。
2. 勻漿裂解：加入10倍體積的預冷的Mitochondria Lysis buffer(如需獲得細胞漿蛋白，應提前加入PMSF，至PMSF濃度為1×)，置于冰浴上Dounce勻漿器中，勻漿10～20次。 不同組織或不同勻漿器所需的勻漿次數有所不同，需自行優化。
3. 離心：4℃，600g離心5min以去除細胞核、未破碎的細胞和大的膜碎片。注：如需獲得純度更高的線粒體，可以將此步驟的離心速度改為2000g離心3min，其缺點是相同數量細胞的線粒體抽提得率會下降。
4. 上清液轉移至一干凈離心管，4℃12000g離心10min。注：如需獲得純度更高的線粒體，可以將此步驟的離心速度改為6000g離心10min，其缺點是相同數量細胞的線粒體抽提得率會下降。
5. 棄上清，沉淀為線粒體，如果希望獲得去除線粒體的細胞漿蛋白，應在本步驟中收集上清，并且在收集上清時注意勿觸及沉淀。隨后把收集的上清12000g，4℃離心10min，上清即為去除線粒體的細胞漿蛋白。
6. 保存：棄上清，用適當緩沖液懸浮沉淀。如果用于線粒體酶活性或功能的分析，線粒體沉淀應重懸于Mitochondria Stock buffer；如果用于線粒體蛋白的分析，獲得的細胞漿蛋白應保存于1×Protein Stock buffer，即按細胞漿蛋白：Protein Stock buffer (5×)=1:4比例混合；如果用于雙向電泳，應使用恰當的保存液。
注意事項：
1. 試劑 (如 PMSF)對于不同實驗不必全部使用，在實驗條件成熟后可以不必使用。
2. 如果不是用于制備線粒體蛋白，Mitochondria Lysis buffer 不必加入 PMSF。如果用于制備線粒體蛋白樣品，Mitochondria Lysis buffer 需添加 PMSF。PMSF 一定要在試劑加入到樣品中前 1～2min 內加入，以免 PMSF在水溶液中很快失效。
3. 分離線粒體的所有步驟均需在冰上或 4℃進行，所用溶液需冰浴或 4℃預冷，全部操作時間盡量控制在 1h 以內。
4. 通常在分離線粒體時前后兩次離心速度選取 1000g 和 12000g，如果希望純度更高，但對線粒體的得率要求不高，前后兩次離心速度可用 2000g 和 6000g。
5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。有效期：一年有效。
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