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細胞培養(yǎng)常遇問題集錦（十四）2021/12/23
本期我們繼續(xù)更新細胞培養(yǎng)常遇問題，看下有沒大家遇到的，讓我們細胞培養(yǎng)做得更好，個個細胞都養(yǎng)得“肥肥白白”~話不多說，以下為大家奉上本期精華~66、問：thp-1誘導貼壁之后，背景比較臟，還隱約看到有東...
內質網(wǎng)自噬及其特點詳解剖析2021/12/22
內質網(wǎng)自噬的概念最早于2007年提出，是指內質網(wǎng)應激誘導酵母發(fā)生針對內質網(wǎng)的選擇性的自噬現(xiàn)象，其主要作用是降解多余的內質網(wǎng)膜，控制內質網(wǎng)的體積從而維持細胞穩(wěn)態(tài)。近年來隨著對內質網(wǎng)自噬的研究方法、形成機...
腫瘤免疫治療靶點及相關小分子抑制劑/激動劑詳解2021/12/22
腫瘤相關的免疫治療主要包括細胞療法、免疫檢查點抑制劑及腫瘤疫苗三大類。免疫檢查點抑制劑（ICIs）主要是單克隆抗體（mAbs），而抗體類藥物大多存在不能口服、組織滯留時間延長、不能透膜等多種缺陷。因此...
如何快速測量細胞劃痕寬度？2021/12/22
細胞劃痕實驗可謂是性價比高的一個小實驗了。可以在不額外購買實驗設備的情況下，一定程度地評價腫瘤細胞或者成纖維細胞的遷移能力。在課題組經(jīng)費的限制下，這個實驗成為很多老板的*。細胞劃痕實驗本身的操作很簡單...
細胞培養(yǎng)常遇問題集錦（十三）2021/12/22
細胞培養(yǎng)常遇問題集錦系列，由于之前小編都在收集一些大家實驗室中常遇到的問題并解答，現(xiàn)在和大家分享下最新的一期，希望這些真實案例可以真切的幫助到童鞋們在細胞實驗中少走彎路和解決問題，話不多說，以下上“正...
如何提升細胞轉染實驗效率?2021/12/22
細胞轉染是細胞生物學和分子生物學的一種常用的技術手段。而轉染效率低卻是實驗童鞋們經(jīng)常遇到的問題，尤其是原代細胞轉染，更是因為難度大，號稱誰碰誰死，而令人談虎色變。不，應該是談原代細胞色變。那么，當實驗...
從M13噬菌體模板合成固定長度的單鏈DNA探針2021/12/21
材料與儀器大腸桿菌DNA聚合酶IKlenow片段限制性內切核酸酶模板DNA寡核苷酸引物乙酸銨DTTEDTA乙醇NaCl酚氯仿TBE電泳緩沖液Tris-ClKlenow基礎緩沖液dNTP溶液變性聚丙烯酰...
差異顯示PCR2021/12/21
材料與儀器反轉錄酶熱穩(wěn)定DNA聚合酶錨定3'-寡核苷酸引物隨機5'-寡核苷酸引物總RNA帶放射標記的dATP擴增緩沖液DD-PCR反轉錄緩沖液DTTdNTP貯存液胎盤RNase抑制劑測序膠上樣緩沖液瓊...
cDNA 3'末端的快速擴增（3’-RACE)2021/12/21
原理在用oligo(dT)引物構建的cDNA文庫中，偶而發(fā)生部分cDNA克隆缺失了與靶mRNA3'末端互補的序列。這部分序列到底是在cDNA合成過程中還是在分子克隆中怎樣缺失和在哪個環(huán)節(jié)中缺失的尚不清...
cDNA 5’末端的快速擴增（5’-RACE）2021/12/21
原理在分子克隆中沒有比分離缺乏相應的mRNA5'末端的序列特征結構的cDNA克隆更易失敗的了。通常存在于cDNA基因文庫中的部分克隆，由于反轉錄酶未能沿全長mRNA模板延伸*，合成的cDNA第一條鏈往...
純化的RNA的點雜交和狹線雜交2021/12/21
原理點雜交和狹線雜交技術（Kafatosetal.1979)用于在同一固相支持物（通常為帶電荷的尼龍膜）上固定幾種核酸樣品，然后用合適的探針與已固定的樣品雜交，并由此判斷靶序列的濃度。通過估計樣品點發(fā)...
從鼠尾或其他小樣本中制備基因組DNA2021/12/20
原理這一簡單的實驗方案在成百上千的實驗室被廣泛應用于轉基因或基因剔除小鼠的基因型鑒定以及從小量培養(yǎng)的細胞或組織塊中提取DNA。材料與儀器蛋白酶K培養(yǎng)的細胞鼠尾或小鼠組織乙醇異丙醇酚氯仿異戊醇磷酸鹽緩沖...
從96孔微培養(yǎng)板生長的哺乳動物細胞中分離DNA2021/12/20
原理本方案由Ramirez-solis等的方法1992，1993改進而成，是一種從微培養(yǎng)板的每個孔生長的真核細胞抽提基因組DNA的簡便有效的方法。每個孔產(chǎn)生的基因組DNA足以做數(shù)次聚合酶鏈反應（PCR...
CPB沉淀法純化放射性標記的寡核苷酸實驗2021/12/20
材料與儀器十六烷基溴化吡啶EDTA-TrisEDTA-Tris-DNA溶液乙醇-乙酸鈉溶液乙醇乙酸鈉TE(pH7.6)或適當?shù)念A雜交液核酸和寡核苷酸純化的原料干冰乙醇浴步驟材料溶液和緩沖液稀釋貯存液至...
從大規(guī)模裂解物中制備λ噬菌體顆粒實驗2021/12/20
原理從大規(guī)模培養(yǎng)物中制備的λ噬菌體，可在高鹽存在下用聚乙二酵(PEG)沉淀的辦法從裂解物中回收得到。殘余的細胞碎片和PEG可用氯仿抽提。在進一步純化之前，建議測定噬菌體制備物的得率。材料與儀器大腸桿菌...
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