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cDNA文庫構建2021/12/20
原理cDNA文庫是指某生物某發育時期所轉錄的全部mRNA經反轉錄形成的cDNA片段與某種載體連接而形成的克隆的集合。經典cDNA文庫構建的基本原理是用Oligo(dT)作逆轉錄引物，或者用隨機引物，給...
乙醇沉淀法2021/12/17
原理DNA溶液是DNA以水合狀態穩定存在，當加入乙醇時,乙醇會奪DNA周圍的水分子，使DNA失水而易于聚合。一般實驗中,是加2倍體積的無水乙醇與DNA相混合,其乙醇的最終含量占67%左右。因而也可改用...
測定用乙醇固定的 DNA 的含量2021/12/17
原理DNA和RNA在260nm處有一很高的吸收峰，利用這個原理我們測其OD260，再推算出其濃度。材料與儀器細胞樣品PBS緩沖液70%乙醇PI液離心機恒溫箱篩網步驟一、培養細胞的DNA含量的測定制備單...
BSP克隆測序法2021/12/17
材料與儀器【材料】DNA目標片段；【試劑】亞硫酸氫鹽；步驟基因組DNA制備亞硫酸氫鹽修飾DNA純化與回收PCR擴增產物克隆測序注意事項1、組織樣本：-20℃或-80℃低溫冰箱中保存，液氮或者干冰運輸；...
變性RNA在膜上的轉移和固定2021/12/17
原理多數情況下，為檢測特定的靶mRNA，需先將RNA通過瓊脂糖電泳分離后，再從膠上轉移到二維支持物上，（通常用尼龍膜)，再與持異的標記探針雜交。正如在Nonhem雜交中討論的情況，實驗者可采用多種試劑...
哺乳動物 DNA 的快速分離2021/12/17
原理根據本方案制備的哺乳動物DNA約20~50kb，適于作PCR反應的模板。DNA產量在0.5到3.0μg/mg組織之間變化，或者是5~15μg/300μl全血。材料與儀器無DNase的RNase蛋白...
哺乳動物細胞抽提物中熒光素酶的測定實驗2021/12/16
原理螢光素酶是理想的報告基因，因為哺乳動物細胞中不含內源性螢光素酶，一旦轉錄完成立刻就生成功能性的螢光素酶，同時在所有的化學發光反應中，它的光產物具有最高的量子效率，檢測靈敏度高。熒光素酶報告基因被廣...
薄層層析法測定氯霉素酰基轉移酶含量實驗2021/12/16
材料與儀器用攜帶感興趣DNA的pCAT載體轉染的哺乳動物培養細胞CAT反應混合物1乙基乙酸裂解緩沖液不含鈣鹽和鎂鹽的磷酸鹽緩沖液薄層層析（TLC)溶劑Tris-Cl放射性墨水干冰乙醇浴不溶于乙醇的墨水...
BAL31 核酸酶消化法產生雙向缺失突變體實驗2021/12/16
材料與儀器BAL31緩沖液EGTA乙醇酚氯仿醋酸鈉蔗糖凝膠上樣緩沖液TE噬菌體T4DNA聚合酶BAL31核酸酶大腸桿菌DNA聚合酶IKlenow片段限制性內切酶瓊脂糖凝膠用于凝膠電泳的DNA分子量標準...
人生長激素的放射免疫分析法2021/12/16
材料與儀器hGH表達質粒洗滌液親和素包被珠試管γ計數儀步驟1.取轉染了hGH表達質粒的哺乳動物細胞的培養液100~500μl。2.加100μl培養液或標準品至12mm×75mm圓底試管中。加入100μ...
CAT活性的相-抽提分析法2021/12/16
材料與儀器轉染細胞氯霉素Tris·ClTMPD二甲苯離心機離心管培養箱步驟一、來源于哺乳動物細胞1.按“CAT活性的層析分析法”中的步驟1~5的凍融法，制備哺乳動物細胞提取物。如果用胰蛋白酶消化或制細...
含甲酰胺的測序膠2021/12/15
原理聚丙烯酰胺凝膠加人甲酰胺可以使造成條帶壓縮的測序產物的二級結構不穩定。材料與儀器DNA甲酰胺甲醇乙醇TEMEDSDS電泳儀步驟1.按基本方案步驟1~5組裝凝膠平板夾層。2.按所需濃度配制甲酰胺凝膠...
電解質梯度測序膠 簡介2021/12/15
原理通過簡單地提高下槽緩沖液的鹽濃度，使凝膠底部的離子強度得以提高，在電泳過程中，鹽離子可以電泳進入凝膠并產生重復性好的及有效的梯度。材料與儀器DNATBE乙酸鈉電泳儀步驟1.按基本方案步驟1~22灌...
變性聚丙烯酰胺凝膠的制備實驗2021/12/15
材料與儀器丙烯酰胺溶液過硫酸銨水溶液去離子水去污劑乙醇KOH甲醇溶液聚硅氧烷溶液TBE電泳緩沖液TEMED尿素彈簧夾干膠架封膠帶膠板（配對的）和隔板手套凡士林保護性的工作合紙鯊魚齒梳子有臂的燒瓶隔板注...
原位裂解細胞的CAT分析法2021/12/15
材料與儀器轉染細胞Triton裂解液培養皿培養箱步驟1.60mm培養皿中轉染了CAT表達質粒的細胞，用2mlPBS洗1次。每培養皿加入2ml低滲緩沖液，在室溫下溫育2~5min。2.吸去低滲緩沖液，加...
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